尿液蛋白質定量檢測

定量檢測

正常人尿液中含有微量的蛋白質,每天排出量在150mg 以下,其中以白蛋白占多數,隨不同病種有一定量的球蛋白和其它蛋白。隨著腎病科研工作的開展,以觀察患者每天排出蛋白質的量以示病情的變化,因此尿液蛋白質定量在臨床上有實際套用價值,已成為醫院化驗室常規的檢驗項目。

檢測方法

麗春紅-S法　尿液標本中的蛋白質與麗春紅-S染料混勻後一起被三氯醋酸沉澱，將沉澱物溶解於鹼性溶液中，此時溶液呈紫色，顯色深度與蛋白質濃度成正比。　試劑　三氯乙酸-麗春紅-S試劑原液：稱取麗春紅-S 1.0 g，加入到1 000 ml 300 g/L三氯乙酸中溶解。　三氯乙酸-麗春紅-S試劑套用液：將原液用蒸餾水按1：10稀釋，放置室溫穩定數月。　蛋白定性試劑。0.2 mol/L氫氧化鈉溶液。　蛋白標準曲線：把定值蛋白稀釋成不同的濃度，按操作測定其吸光度，以吸光度為橫坐標，以稀釋後的蛋白濃度為縱坐標繪製標準曲線。

雙縮脲比色法

以磷鎢酸乙醇溶液沉澱尿中的蛋白質，在鹼性介質中蛋白質與銅離子形成紫紅色絡合物，與標準液比色即可得出尿中蛋白質的含量。

檢測操作

先做尿蛋白定性試驗，以適當稀釋標本。在試管中加入100μl標本，再加入1 ml三氯乙酸一麗春紅-S套用液，混勻後以3 000 r/min離心15分鐘，吸去上清液，倒置於潔淨濾紙上。在沉澱中加入0.2 mol/L氫氧化鈉溶液l ml，用560 nm波長測定其吸光度，查標準曲線的蛋白含量。

測定參考值

46.5±18.1 mg/L

檢測注意事項

尿液如被稀釋應乘以稀釋倍數。尿中血紅蛋白含量>5 mg/L時影響結果。離心後上清必須全部棄去，若沉澱中夾帶有麗春紅-S影響比色結果。

定量檢測試劑

蛋白沉澱液：稱取磷鎢酸7.5 g，加入30 ml蒸餾水、95%乙醇385 ml、濃鹽酸25 ml。　雙縮脲液：(1)稱取枸櫞酸鈉34.6 g，無水碳酸鈉20 g，加入120 ml蒸餾水使其溶解;(2)稱取硫酸銅3.46 g，加入20 ml蒸餾水使其溶解。將(1)、(2)混合，加入蒸餾水至200 ml，備用。0.75 mol/L氫氧化鈉溶液。蛋白標準液(1.5 g/L)：稱取150 mg結晶型凍乾人血清白蛋白，加入100 ml的3 g/L苯甲酸溶液溶解。