兼併引物PCR (degenerate primer PCR) 是指用設計引物的方法來擴增所有已知順序核苷酸序列的PCR 法。因為密碼子具有兼併性,為了擴增一些已知編碼順序的核酸序列,可通過設計兼併引物進行擴增。兼併引物是指代表編碼單個胺基酸所有不同鹼基可能性的不同序列的混合物。兼併度越低,產物特異性越強。
基本介紹
- 中文名:兼併引物PCR
- 外文名:degenerate primer PCR
- 定義:用設計引物的方法來擴增所有已知順序核苷酸序列的PCR法
兼併引物PCR (degenerate primer PCR) 是指用設計引物的方法來擴增所有已知順序核苷酸序列的PCR 法。因為密碼子具有兼併性,為了擴增一些已知編碼順序的核酸序列,可通過設計兼併引物進行擴增。兼併引物是指代表編碼單個胺基酸所有不同鹼基可能性的不同序列的混合物。兼併度越低,產物特異性越強。
兼併引物PCR (degenerate primer PCR) 是指用設計引物的方法來擴增所有已知順序核苷酸序列的PCR 法。因為密碼子具有兼併性,為了擴增一些已知編碼順序的核酸序列,可通過設計兼併引物進行擴增。兼併引物...
簡併引物是指代表編碼單個胺基酸所有不同鹼基序列可能性引物的混合物。PCR為了增加特異性,可以參考密碼子使用表,根據不同生物的鹼基使用偏好,減少簡併性。簡併度越低,產物特異性越強,設計引物時應儘量選擇簡併性小的胺基酸,並避免引物3’末端簡併。密碼簡併性表 胺基酸 密碼子數 M、W 1 個;C、D、E、F...
PCR引物設計的目的是為了找到一對合適的核苷酸片段,使其能有效地擴增模板DNA序列。引物的優劣直接關係到PCR的特異性與成功與否。設計原則 1. 引物套用核酸系列保守區內設計並具有特異性。2.產物不能形成二級結構。3. 引物長度一般在15~30鹼基之間。4. G+C含量在40%~60%之間。5. 鹼基要隨機分布。6. 引物自身...
重疊延伸PCR技術 (genesplicingbyoverlapextension PCR,SOE PCR),是採用具有互補末端的引物,使 PCR 產物形成了重疊鏈,從而在隨後的擴增反應中通過重疊鏈的延伸,將不同來源的擴增片段重疊拼接起來的技術。技術原理 重疊延伸 PCR 的原理並不複雜,如果有 2 個基因或者一個基因和一個終止子,要將它們連線到一起,...
巢式PCR是一種變異的聚合酶鏈反應(PCR),使用兩對(而非一對)PCR引物擴增完整的片段。第一對PCR引物擴增片段和普通PCR相似。第二對引物稱為巢式引物(因為他們在第一次PCR擴增片段的內部)結合在第一次PCR產物內部,使得第二次PCR擴增片段短於第一次擴增。巢式PCR的好處在於,如果第一次擴增產生了錯誤片段,則...
PCR引物設計的目的是找到一對合適的核苷酸片段,使其能有效地擴增模板DNA序列。如前述,引物的優劣直接關係到PCR的特異性與成功與否。對引物的設計不可能有一種包羅萬象的規則確保PCR的成功,但遵循某些原則,則有助於引物的設計。引物設計有 3 條基本原則:首先引物與模板的序列要緊密互補,其次引物與引物之間避免...
隨機引物PCR(arbitrarily primed PCR,AP-PCR)是指在對模板順序一無所知的情況下,通過隨意設計或選擇一個非特異性引物,在PCR反應體系中,首先在不嚴格條件下使引物與模板DNA中許多序列通過錯配而復性。在理論上,並不一定要求整個引物都與模板復性,而只要引物的一部分特別是3’端有3-4個以上鹼基與模板互補復性...
DOP (Degenerate oligonucleotide-primed PCR),兼併寡核苷酸引物PCR,常用的一種細胞擴增策略 面向數據的分析技術(Data-Oriented Parsing)首先由Scha(1990)年提出。該處理技術具體表達了這樣的假設:人類對語言的領悟和創造依賴於以往具體的語言經驗,而不是依賴於抽象的語法規則。DOP技術框架可以分為:(1)建立包括...
《大熊貓MHC基因II類分子的多態性與肺炎感染之間的關係》是依託浙江大學,由萬秋紅擔任項目負責人的專項基金項目。項目摘要 本項目擬:(1)通過對GENBANK公用資料庫中各種哺乳動物基因組資料庫的同源比較,設計MHC基因II類分子的通用性兼併引物;(2)以大熊貓基因組DNA為模板,利用設計的兼併引物進行PCR擴增,並對...
兼併複合PCR (degenerate MPCR)是通過設計兼併PCR引物來檢測一種針對同一性狀基因或一類性狀基因的同源核苷酸序列的新型複合PCR。Guo等(2012)建立了一種四重兼併引物PCR方法, 同時擴增轉基因作物主要使用的8個外源目的基因, 理論上可覆蓋90餘種轉基因作物。微滴PCR(microdroplet PCR)技術可將單個DNA分子被分配到納升級...
項目以一隻海南坡鹿病理檢查的富餘外周血液為材料,提取了mRNA和基因組DNA,通過利用GenBank等公共網路資料庫和生物信息技術,設計了海南坡鹿II類MHC基因的PCR擴增兼併引物。利用該兼併引物,結合本研究團隊已建立的HURRAH技術,本項目組成功分離了海南坡鹿具有表達功能的全部7個經典的II類MHC基因(1個DRA、1個DRB、2...
(1)PCR引物:一般使用擴增HIVgag和/或pol和/或env和/或LTR等引物。進行RNA逆轉錄時可使用下游特異性引物或隨機引物。引物設計可參考文獻或自行設計,應儘量涵蓋常見的HIV流行毒株,也可使用兼併性引物。(2)主要試劑:包括核酸提取純化、逆轉錄、PCR所需的試劑。使用商品化核酸提取純化試劑、逆轉錄酶反應試劑和PCR...
其主要原理是根據已知DNA序列,分別設計三條同向且退火溫度較高的特異性引物(SP Primer),與試劑盒中提供的四種經過獨特設計的退火溫度較低的兼併引物,即AP1、AP2、AP3、AP4進行熱不對稱PCR反應。通常情況下,其中至少有一種簡併引物可以與特異性引物之間利用退火溫度的差異進行熱不對稱PCR反應,通過三次巢式PCR...
一、反轉錄PCR /147 二、反向PCR /149 三、複合PCR /150 四、定量PCR /153 五、不對稱PCR /153 六、嵌套PCR /154 七、免疫PCR /154 八、長PCR /155 九、熱啟動PCR /155 十、標記PCR(彩色PCR) /155 十一、重組PCR /156 十二、差向顯示PCR /156 十三、降落PCR /156 十四、兼併引物PCR /157 十五...