重疊延伸PCR技術(genesplicingbyoverlapextensionPCR,簡稱SOEPCR)由於採用具有互補末端的引物,使PCR產物形成了重疊鏈,從而在隨後的擴增反應中通過重疊鏈的延伸,將不同來源的擴增片段重疊拼接起來。此技術利用PCR技術能夠在體外進行有效的基因重組,而且不需要內切酶消化和連線酶處理,可利用這一技術很快獲得其它依靠限制性內切酶消化的方法難以得到的產物。重疊延伸PCR技術成功的關鍵是重疊互補引物的設計。重疊延伸PCR在基因的定點突變、融合基因的構建、長片段基因的合成、基因敲除以及目的基因的擴增等方面有其廣泛而獨特的套用。
基本介紹
- 中文名:重疊延伸PCR
- 外文名:genesplicingbyoverlapextensionPCR
- 簡稱:SOEPCR
- 屬性:技術

![]() | 如圖所示,對於整個DNA鏈(可看做由ab、ef和cd片段共同組成),若想通過重疊延伸PCR技術定點敲除掉ef片段,使得ab和cd片段連線起來(將連線後的DNA鏈命名為ad片段),需要分兩步進行PCR(本實驗有個特定要求,ef片段不能是隨機的,因為在下文第二步PCR過程中要求ab和cd片段末端大部分能夠互補才行,不一定要完全互補,因此若要進行重疊延伸PCR,ef片段必須是根據完整序列分析後設計出來的)。第一步PCR:分別利用ab片段的引物F和R2擴增ab片段以及cd片段的引物F2和R擴增cd片段。這樣便分別獲得了ab片段和cd片段。第二步PCR:ab和cd片段既作為模板DNA,其末端又分別作為另一片段的引物(此為設計時要保證二者末端大部分序列可互補的原因),這樣就可以在這一步PCR過程的第一輪循環中合成完整的ad片段。在隨後的循環中利用引物F和R,即可擴增完整的ad片段(時聖晴分析)。 |