《保健食品中葛根素的測定》由原衛生部提出並歸口，中國疾病預防控制中心營養與食品安全所負責起草，規定了保健食品中葛根素的測定方法，適用於以葛根為主要原料的保健食品中葛根素的測定。該標準採用的原理是根據葛根素溶於甲醇、水等極性溶劑的特性，試樣採用70%甲醇溶液進行超聲提取，然後定容，單一葛根提取物製成的試樣過濾後直接利用高效液相色譜儀分離，紫外檢測器檢測，根據保留時間和峰面積進行定性和定量。
基本介紹
- 中文名：保健食品中葛根素的測定
- 外文名：Determination of puerarin in health foods
- 發布部門：衛生部、國家標準化委員會
- 實施日期：2008-11-01
- 發布日期：2008-07-31
- 標準號：GB/T 22251-2008
前言,範圍,原理,試劑和材料,儀器和設備,分析步驟,試樣處理,標準曲線的製備,液相色譜參考條件,色譜分析,結果計算,精密度,色譜圖,
前言
本標準由中華人民共和國衛生部提出並歸口。
本標準負責起草單位:中國疾病預防控制中心營養與食品安全所。
本標準參加起草單位:北京市疾病預防控制中心。
本標準主要起草人:楊大進、魯傑、宋書鋒、馬蘭、羅仁才。
本標準為首次發布。
範圍
本標準規定了保健食品中葛根素的測定方法。
本標準適用於以葛根為主要原料的保健食品中葛根素的測定。
當信噪比S/N=3，取樣量為1. 0 g，定容體積為10 mL時，本方法的檢出限(LOD)為2. 0 X 10-5 g/kg；當信噪比S/N=10，取樣量為1. 0 g，定容體積為10 mL時，方法的定量限(LOD)為6.0X10-5g/kg。方法的線性範圍為5.0μg/mL~50μg/mL。
原理
根據葛根素溶於甲醇、水等極性溶劑的特性，試樣採用70%甲醇溶液進行超聲提取，然後定容，單一葛根提取物製成的試樣過濾後直接利用高效液相色譜儀分離，紫外檢測器檢測，根據保留時間和峰面積進行定性和定量。由多種植物提取物製成的試樣需經大孔吸附樹脂淨化後再進行高效液相色譜分析。
試劑和材料
- 甲醇：優級純。
- 無水乙醇：分析純。
- 冰乙酸：優級純。
- 36%乙酸：用冰乙酸與水按9：16的比例配製。
- 水：為實驗室一級用水，電導率（25℃）為0.01mS/m。
- 葛根素標準品：純度≥95%。
- 葛根素標準儲備溶液（2.0mg/mL）：準確稱取0.02g葛根素標準品（精確至0.0001g），用70%甲醇溶解並定容至刻度，混勻（此標準使用液在4℃冰櫃中可保存7d）。
- 葛根素標準使用液（200μg/mL）：準確吸取1.0mL葛根素標準儲備溶液於10mL容量瓶中，用70%甲醇定容至刻度，混勻（此標準使用液在4℃冰櫃中可保存7d）。
- D101大孔吸附樹脂：樹脂用70%乙醇浸泡24h，使其充分溶脹，反覆用去離子水沖洗，將乙醇洗淨後裝入層析柱上，柱高10cm。
- 層析柱：長15cm，內徑1.0cm。
儀器和設備
- 高效液相色譜儀:附紫外檢測器。
- 超音波清洗器。
- 離心機:4 000 r/min。
分析步驟
試樣處理
單一葛根提取物製成的試樣:根據試樣含量，稱取0. 50 g～1.00 g試樣(精確至0. 001 g)，加適量70%甲醇，於超音波清洗器中超聲提取20 min，冷卻至室溫，再用70%甲醇定容至10 mL,混勻，靜置，上清液經0.45μm微孔濾膜過濾後，待液相色譜分析。
多種植物提取物製成的試樣:根據試樣含量，準確稱取0. 50 g～1. 00 g試樣(精確至0. 001 g) ,加適量水溶解，並於超音波清洗器中超聲20 min，冷卻至室溫後用水定容至10 mL,混勻，4 000 r/min離心5 min。取1 mL上清液上大孔吸附樹脂層析柱，用約40 mL水以1 mL/min淋洗雜質，再用50 mL70%甲醇洗脫葛根素，將洗脫液置於沸水浴蒸發近乾，用70%甲醇將其溶解並定容至1 mL，過0.45 μm濾膜後待高效液相色譜用。
標準曲線的製備
分別吸取標準使用液，用70%甲醇稀釋並定容的濃度分別為5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL、40 μg/mL、50μg/mL的標準系列。
液相色譜參考條件
- 色譜柱:ODS C18 ,250 mmX4. 6 mm,5 μm。
- 流動相:甲醇+36%乙酸+水=25+3+720
- 流速:0. 6 mL/min。
- 檢測波長:247 nm。
- 進樣體積:10μL。
色譜分析
在給定的儀器條件下進標準溶液系列和試樣淨化液進行液相色譜儀分析，以保留時間定性，以峰高或峰面積定量。
結果計算
試樣中葛根素的含量按式(1)進行計算:
式中:
X—試樣中葛根素的含量，單位為克每千克(g/kg）；
c—由標準曲線求得進樣液中葛根素的濃度，單位為微克每毫升(μg/mL) ；
V—試樣定容體積，單位為毫升(mL) ；
m—試樣質量，單位為克(g)。
計算結果保留兩位有效數字。
精密度
在重複條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對值不得超過算術平均值的10%。
色譜圖
在上述色譜條件下的色譜圖見圖1～圖2。
圖1 葛根素標準色譜圖
圖2 多種植物提取物製成的試樣色譜圖