《siRNA c60m3誘導慢粒白血病細胞系向紅系分化的分子機制研究》是依託復旦大學，由范翠青擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：siRNA c60m3誘導慢粒白血病細胞系向紅系分化的分子機制研究
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：范翠青
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
誘導分化治療是白血病治療策略中最具潛能的方向之一。我們前期研究中，通過siRNA文庫的篩選獲得了能明顯誘導慢粒K562細胞向紅系分化的siRNA clone-60-mut-3（siRNA c60m3），此siRNA還抑制了細胞生長，但機制未明。因此，本項目擬在原有基礎上，1、通過表達譜晶片與生物素標記的siRNA的方法，尋找此siRNA可能作用的下游靶基因；2、通過過表達及低表達候選基因，研究其對K562細胞生長、分化的影響，篩選出有功能作用的基因； 3、研究有功能作用的基因與紅系分化關鍵轉錄因子如GATA1及分化信號通路中關鍵分子的相互作用，初步闡明基因作用機制。本研究將：明確siRNA c60m3 通過作用於靶基因誘導K562細胞向紅系分化過程中所參與的信號通路及分子機制；力求發現慢性粒細胞白血病治療的新靶點，為腫瘤的誘導分化治療提供新的線索。
結題摘要
誘導分化治療是白血病治療中最具潛力的治療策略之一。在前期研究中，我們通過siRNA文庫的高通量篩選獲得了能明顯誘導慢粒K562細胞向紅系分化的siRNA clone-60-mut-3（siRNA c60m3），該siRNA還抑制了K562細胞的生長，但其分子機制未明。本項目在原有研究基礎上探討了siRNA c60m3可能作用的靶基因及誘導紅系分化的分子機制，並且發現了一個新的可以誘導K562細胞向紅系分化的基因。首先，通過lncRNA晶片獲得了與siRNA c60m3可能相互作用的基因及lncRNAs。與陰性對照組相比，共有200多個基因與200多個lncRNAs在siRNA c60m3組中顯著差異表達，其中大部分基因與lncRNAs沒有報導與紅系分化或細胞增殖相關，作為siRNA c60m3的候選靶基因。其次，通過生物素標記的siRNA與測序相結合的方法獲得了siRNA c60m3可能直接作用的靶基因。與陰性對照組相比，siRNA c60m3組中表達上調的基因有382個，這些基因可能是siRNA c60m3直接作用的靶標。通過GO-Pathway分析發現，篩選到的差異基因涉及與細胞分化、增殖等相關的信號通路，比如Hematopoietic cell lineage、Wnt、JAK-STAT、MAPK、mTOR 等信號通路，表明siRNA c60m3與靶基因相互作用後，可能通過調控這些信號通路，從而促進了K562細胞的紅系分化並抑制了細胞的生長。最後，通過基因功能研究，發現了一個可以促進K562細胞向紅系分化的新基因Gene X，該基因使K562細胞紅系分化特異性分子CD235表達升高，並抑制了K562細胞的增殖。至目前為止，未有報導該基因與紅系分化或細胞增殖相關，是一個基因功能的新發現。我們的研究結果初步闡明了siRNA c60m3可能作用的靶基因及促進紅系分化的機制，為腫瘤細胞分化機制的研究提供了新的線索，也為白血病的誘導分化治療提供了新的潛在藥物作用靶點及新思路。
