《miR-223調控p120/NF-κB信號通路在氣道炎症中的作用及其機制》是依託華中科技大學，由秦靈芝擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：miR-223調控p120/NF-κB信號通路在氣道炎症中的作用及其機制
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：秦靈芝
- 依託單位：華中科技大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
連環素p120(簡稱p120)已被證實在多種組織和器官中發揮抑制炎症的作用。我們研究發現，p120通過調控NF-κB活化參與氣道上皮的炎症反應。前期晶片篩選和實時定量PCR發現：在小鼠急性肺損傷模型中，miR-223表達下調，且與NF-κB下游靶基因之一——IL-1β變化相反。細胞膜漿分離提取蛋白及Western blot技術檢測發現：氣道炎症反應中，miR-223功能變化影響細胞質p120的表達。但氣道炎症中，miR-223是否調控p120/NF-κB信號通路及其具體機制並不十分清楚。本課題組將建立體內外氣道炎症反應模型，運用慢病毒過表達、反義核苷酸和螢光素酶報告基因等技術，研究氣道炎症反應中，miR-223對p120/NF-κB信號通路的調控作用，以進一步明確p120/NF-κB通路的調控機制，為臨床治療及藥物研究提供新思路和新治療靶點。
結題摘要
我們前期研究發現，連環素p120通過調控NF-κB活化參與氣道的炎症反應，但其中的確切機制並未闡明。 microRNA-223(miR-223)與炎症反應關係密切。那么，在氣道炎症反應中，miR-223是否與p120及NF-κB信號通路存在一定關聯？本實驗利用內毒素脂多糖（LPS）刺激體外培養的人氣道上皮細胞構建炎症反應的體外模型，檢miR-223及p120表達變化及其對NF-κB信號通路的影響，初步探討氣道炎症的分子機制。首先，Western Blot檢測發現LPS刺激16HBE可激活NF-κB通路，p-IKKα/β、p-IκBα及p-p65 表達增高，IKKα及IκBα呈現先減少後升高的趨勢；p120蛋白表達降低呈時間依賴性，RT- PCR顯示：miR-223 在 LPS 刺激後表達上升，p120 mRNA表達下調。接著，將miR-223類似物、miR-223抑制物各自轉入16HBE 細胞。轉入miR-223類似物，與僅LPS刺激組對比，p-p65 表達增加更加明顯，免疫螢光檢測顯示p65在核內分布更多，其下游靶基因—IL-6和COX-2 mRNA升高更為顯著。同時轉染miR-223類似物及p120質粒，與轉染miR-223類似物後 LPS 刺激和僅 LPS 刺激組比較, COX-2、IL-6的mRNA水平在轉入p120 質粒後均有下降, NF-κB p65磷酸化水平降低， p65入核抑制。最後，G-LISA結果顯示，miR-223 促進 NF-κB信號活化也是通過 RhoA/ROCK調節。我們發現，miR-223可能通過靶向負性調節p120的表達，增強RhoA活性，而實現對NF-κB信號通路的調控。這將為深入探討氣道炎症的發生髮展機制提供理論與實驗依據。
