《miR-221通過靶向PTEN調節胃癌放射敏感性的研究》是依託復旦大學，由李桂超擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：miR-221通過靶向PTEN調節胃癌放射敏感性的研究
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：李桂超
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
胃癌是我國最常見的惡性腫瘤之一。放療不論做為姑息治療或輔助治療都是一種重要的手段，然而由於胃癌的多樣性，不是所有的胃癌患者都能從放射治療中獲益。因此探索胃癌放射敏感分子機制仍是胃癌研究的重要內容。近年來研究發現，不同的胃癌組織類型中存在miRNA差異表達，可能代表胃癌生物特性的不同，而這些差異表達的miRNA又調控者放射敏感相關的基因和信號通路，從而進一步影響胃癌放射敏感性的差異。因此分析不同放射敏感性胃癌的miRNA表達譜，探討差異表達miRNA影響胃癌放射敏感性的機制，將為胃癌放射治療的選擇提供新的思路和理論依據。本研究通過前期miRNA晶片分析不同放射敏感胃癌miRNA表達譜，篩選差異表達miRNA為miR-221，且通過生物信息學方法獲得其靶基因為PTEN，而PTEN對於放射敏感相關的信號通路PI3K/mTOR有一定的調控作用，本研究擬探討miR-221對胃癌放射敏感性的影響機制。
結題摘要
II期臨床實驗被2014年ASTRO收錄為POSTER。患者分為2組，每組4例治療前標本，MicroRNA晶片分析和基因信息學分析。 首先，miR-221，顯示miR221在放射抵抗的胃癌組織樣本和細胞中高表達。假設miR221過表達能引起胃癌細胞的放射抵抗。分析其機制及啟動的相關信號通路。在MGC-803細胞中成功建立miR221過表達穩定細胞株，miR221過表達後，PTEN的表達受到抑制，進一步證明了PTEN是miR221的靶基因。miR221具有促進MGC-803生長的功能，但對細胞周期影響甚小； miR221過表達後，細胞遷移能力明顯下降，明顯抑制細胞凋亡，MGC-803/ miR221形成的克隆數要多於對照組細胞。確定miR221過表達後能引起MGC-803的放射抵抗，PTEN作為其靶基因被下調後發揮了部分作用，但不參與到miR221對細胞行為改變的全過程，而我們的結果顯示miR221對細胞周期改變很小，MGC803/ miR221的凋亡明顯受到抑制。因此miR221通過作用不同的靶基因而共同影響腫瘤細胞的生物學行為。miR221過表達後細胞周期在G2/M期受到明顯阻滯，而DNA損傷標記H2AX在MGC-803/ miR221中出現的高峰期也要早於對照細胞，隨後由於細胞修復開始而開始降低，修復要早於對照細胞，但兩者修復速度接近。 其次 miR-197，miR-197在放射抵抗的患者腫瘤組織中高表達，與放射抵抗相關。LQ存活曲線表明細胞修復增多，計算的α值減小，也表明細胞放射敏感性降低。miR-197過表達組，S期細胞增多，由於DNA合成複製，為細胞同源重組修復提供模板，增加了細胞對放射性的抵抗。ATR通路明顯活化，P-CHK1增強，parp表達增強，細胞DNA修復增強。細胞增殖實驗顯示miR-197能夠促進細胞生長。過表達miR-197後細胞成瘤能力明顯增強。 通過miRNA資料庫targetscan和miRDB比對分析，發現PTPN9是miR-197的潛在靶基因。構建PmiGLO-PTPN9-3‘-UTR luciferase報告載體，分析luciferase活性變化，證實了PTPN9是miR-197的靶基因，轉入miR-197mimics和抑制劑分別下調和增強luciferase活性。 miR-197能夠促進腫瘤的生長，抑制細胞凋亡，增強對射線的抵抗
