《miR-21調控PTEN基因對膿毒症小鼠肺保護作用的實驗研究》是依託南昌大學，由曾振國擔任項目負責人的地區科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：miR-21調控PTEN基因對膿毒症小鼠肺保護作用的實驗研究
- 項目類別：地區科學基金項目
- 項目負責人：曾振國
- 依託單位：南昌大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
抑制肺內巨噬細胞過度激活、降低肺內炎症過度反應是膿毒症時肺保護的根本措施。國外最新研究和申請人參與的國家自然科學基金的研究表明miR-21與肺泡巨噬細胞炎症反應密切相關，本申請項目擬探索性地將miR-21轉染進體外培養的原代小鼠肺泡巨噬細胞，觀察其對靶基因PTEN和PI3K/PKB信號通路及其下游炎症因子的影響，研究miR-21調控肺泡巨噬細胞炎症反應的機制。在此基礎上，考慮到肺通過呼吸道與外界相通的解剖學特點和聚乙烯亞胺(polyethylenimine, PEI)的肺靶向性特點，創新性地將專門用於體內實驗的改進型in vivo-jetPEI介導的miR-21由氣道內滴入小鼠膿毒症肺損傷模型，觀察miR-21在肺內轉染效率和調控細胞因子的表達情況，評價其抑制膿毒症肺內炎症反應的效果，探討其對膿毒症小鼠肺損傷保護作用機制，為膿毒症肺損傷的治療探索一種新方法。
結題摘要
急性肺損傷/急性呼吸窘迫綜合症目前主要治療手段是機械通氣，但其死亡率仍高居 40%左右。肺泡巨噬細胞過度激活導致肺內過度的炎症反應是膿毒症肺損傷發生的關鍵因素，近年研究和我們的前期工作表明 miR-21與肺泡巨噬細胞炎症反應密切相關。本課題選用肺泡巨噬細胞作為研究對象，用 LPS 刺激巨噬細胞體外模擬急性肺損傷。體外轉染miR-21 mimic和miR-21 inhibitor 分別上調和下調巨噬細胞內miR-21的表達，通過觀察miR-21對PTEN/PI3K/PKB信號通路及下游炎症因子表達的影響，分析miR-21對LPS誘導肺泡巨噬細胞炎症反應調控的可能機制。同時體外轉染PTEN siRNA下調巨噬細胞內PTEN的表達，通過觀察PTEN下調後對PI3K/PKB/NF-κ信號通路及下游炎症因子表達影響，進一步明確miR-21通過PTEN對急性肺損傷的調控。最後於體外構建膿毒症肺損傷模型，觀察miR-21的表達情況，探討miR-21對膿毒症肺損傷大鼠的保護作用。我們按原計畫開展了實驗研究，並取得了預期的研究成果。（1）在LPS誘導的肺泡巨噬細胞炎症反應中TNF-α表達上調，同時也誘導miR-21表達上調，提示miR-21可能參與了LPS誘導的炎症反應的調控。（2）體外轉染miR-21 mimic能明顯上調細胞內miR-21的表達，並有效下調靶蛋白PTEN的表達。上調miR-21後可增加LPS刺激的NR8383細胞炎症模型中p-AKT表達，促進NF-κB 核移位和炎症因子的釋放；（3）體外轉染miR-21 inhibitor能明顯抑制細胞內miR-21的表達，並有效上調靶蛋白PTEN的表達。下調miR-21後可抑制LPS的刺激的NR8383細胞炎症模型中p-AKT表達，減少NF-κB 的核移位及炎症因子的釋放；（4）體外轉染PTEN siRNA能明顯抑制細胞內靶蛋白PTEN的表達，下調PTEN 後可增加LPS刺激的NR8383細胞炎症模型中p-AKT表達，促進NF-κB 的核移位及炎症因子的釋放；（5）體內LPS氣管內滴入構建的膿毒症肺損傷可誘導miR-21表達升高。結合體外實驗研究結果，表明在大鼠膿毒症肺損傷模型中， miR-21通過作用於靶蛋白PTEN來調控PI3K/PKB的表達，影響NF-κB的活化，從而調控炎症因子的釋放。
