《TWEAK調控自噬和凋亡逆轉上皮性卵巢癌鉑類耐藥的研究》是依託上海交通大學，由邱麗華擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：TWEAK調控自噬和凋亡逆轉上皮性卵巢癌鉑類耐藥的研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：邱麗華
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
上皮性卵巢癌（EOC）鉑類耐藥是導致其五年生存率低的主要原因。腫瘤壞死因子樣凋亡微弱誘導劑(TWEAK)可調控細胞凋亡、增殖和侵襲等生物學行為，但其在EOC鉑類耐藥中作用不明。自噬和凋亡作為細胞死亡的兩大通路，在腫瘤耐藥中起重要作用，但TWEAK對自噬和凋亡是否具調控作用尚不明確。我們前期研究首次發現，TWEAK可逆轉EOC鉑耐藥，TWEAK過度激活EOC細胞自噬和促進其凋亡。本課題將檢測EOC患者原發灶、鉑敏感/耐藥復發灶和EOC順鉑敏感/耐藥株中TWEAK及其受體Fn14表達、細胞自噬及凋亡水平，分析TWEAK及其受體、細胞自噬和凋亡與EOC順鉑耐藥的相關性；同時在體外通過調節自噬、凋亡、自噬或凋亡相關通路的活化狀態探討自噬和凋亡在TWEAK逆轉EOC順鉑耐藥中的作用，闡明TWEAK調控自噬和凋亡，逆轉EOC細胞順鉑耐藥的具體機制，為臨床開創逆轉EOC鉑類耐藥的治療新途徑提供理論依據。
結題摘要
上皮性卵巢癌（EOC）鉑類耐藥和遠處轉移是導致其五年生存率低的主要原因。腫瘤壞死因子樣凋亡微弱誘導劑(TWEAK)及其受體Fn14具有調控細胞凋亡、增殖和侵襲等生物學行為的作用。我們研究發現，TWEAK和Fn14在卵巢惡性腫瘤組織中表達；EOC患者癌組織中sTWEAK的含量高於良性卵巢腫瘤的患者；順鉑敏感組卵巢癌組織中Fn14的表達水平與順鉑耐藥卵巢癌組織中Fn14的表達水平強度具顯著差異。體外實驗發現，TWEAK能誘導自噬，WB結果顯示，TWEAK 可誘導LC3 等表達上調；雷射共聚焦結果顯示，TWEAK 可誘導GFP-LC3緻密斑形成。同時，TWEAK能誘導凋亡，顯著增加A2780/ DDP 細胞對DDP 的敏感性。流式結果顯示,隨著TWEAK 劑量增加,A2780/ DDP 細胞的凋亡顯著增加。TWEAK 刺激後A2780/ cDDP 細胞中caspase 3 活化體表達增加,細胞核染色質發生形態變化,誘導了細胞的凋亡及凋亡小體形成。進一步研究發現，Fn14也與EOC耐藥相關，Fn14過表達質粒轉染A2780/DDP細胞後，DDP的IC50值降低；Fn14能增加順鉑誘導的A2780/DDP凋亡細胞數目; WB結果顯示, 促凋亡蛋白caspase3表達升高，抗凋亡蛋白Bcl2表達明顯下降。同時，TWEAK/Fn14在上皮性卵巢癌轉移中發揮重要作用。Fn14過表達質粒轉染HO8910-PM細胞後，細胞的遷移和侵襲能力明顯降低，同時細胞中EMT相關蛋白表達明顯下降。而 TWEAK作用於腫瘤相關巨噬細胞後，後者能抑制HO8910-PM的增殖和侵襲能力。進一步，我們發現TWEAK可以通過外泌體途徑介導巨噬細胞抑制EOC轉移，Tanswell結果示，巨噬細胞分泌的外泌體可促進EOC細胞株遷移和侵襲能力增高；而TWEAK刺激後，其分泌的外泌體則可降低EOC細胞的侵襲和遷移能力。通過晶片篩選及後續驗證，我們發現TWEAK作用於巨噬細胞後，巨噬細胞釋放的外泌體可轉運mir-7至EOC細胞株。 綜上，認為TWEAK/Fn14在上皮性卵巢腫瘤轉移和鉑類耐藥中具有重要作用，為卵巢癌的治療提供了理論基礎。
