基本介紹
- 中文名：T-H糖蛋白
- 外文名：Tamm Horsfall protein
- ELISA方法：29.78～43.94mg/24h·mg Cr
- 隨意尿：7.42～8.74mg/mg Cr
- 測定方法：酶聯免疫吸附法或放射免疫法。
- 大小：7000KDa
- 分泌細胞：腎小管上皮細胞
定義,臨床意義,提取步驟,抗體製備,
定義
Tamm-Horsfall蛋白（THP）是由腎小管髓袢升支及遠端小管曲部的上皮細胞合成分泌的糖蛋白。正常情況下，尿液中含有少量的THP。
臨床意義
尿THP排出減少見於腎實質病變如慢性腎衰竭及急性腎小球腎炎等導致腎單位大量減少，GFR顯著降低時，而單純下尿路炎症時尿THP水平無變化。尿液THP含量增加見於各種原因如間質性腎炎、尿路長期梗阻、自身免疫性藥物中毒、銅和鉻中毒等疾病引起的腎臟損傷，並與病情相一致。尿道結石患者體外震波碎石治療效果判斷：碎石成功則尿THP含量逐漸升高，至第二天達峰值，之後逐漸下降；若碎石失敗則尿THP含量無變化。
尿Tamm-Horsfall蛋白升高和/或Tamm-Horsfall蛋白抗體陽性，提示腎盂腎炎。
尿液中含量最多的蛋白之一一一T-H蛋白（Tamm-Horsfall protein），可能是一種抑制尿路結石形成的大分子有機物。在草酸鈣結晶體外試驗的有機質中，及大鼠腎結石模型草酸鈣結晶中均發現有THP的存在，同時在乙二醇誘導的草酸鈣尿路結石大鼠模型的腎組織及尿液中THP表達量均減少。但是抑制腎結石形成的機制及其所起的作用，不同的研究得到不同的結果，存在較大爭議。這些爭議如結石患者與正常人群尿中THP含量的差別、THP抑制結石形成的影響因素、THP在結石形成中所起的作用及與其它結石抑制因子之間的相互關係等等，都有待於進一步研究。雖然國外有研究者報導了腎結石大鼠腎臟組織THP表達的結果,但還沒有治療因素干預下腎結石大鼠腎臟組織表達的研究報導。
構椽酸是研究最早最充分的結石抑制因子之一，但其確切的防石機制，與其他大分子抑制因子之間的關係有待於進一步研究。因此，我們研究構椽酸鉀干預下腎結石大鼠腎組織內THP的表達，了解構椽酸鉀干預對THP表達的影響，進一步探討構椽酸鉀抑制結石形成的機制，及構椽酸鉀與THP之間的相互關係，這不僅為解析腎結石發病機理提供實驗依據，對臨床尋求腎結石的防治途徑也具有一定的指導意義。
提取步驟
取正常人尿液20升，加入等量蒸餾水稀釋。放固體氯化鈉於尿液內，使其濃度達。0.58mol/L，充分混勻後於4℃靜置48小時，此時，可見白色絮狀沉澱物形成。棄去上清液，將沉澱物低溫(4℃)離心(3000r/min，30分鐘)將離心後的沉澱物用0.58mol/L的氯化鈉溶液反覆洗3次，然後，溶於一定量的蒸餾水中，對水，置4℃透析3~5天，每日換水4-5次，以徹底清除殘留的氯化鈉，最終獲得無色透明的粒性液體，即為THP。分裝，凍乾，低溫保存備用。將提取的THP，按照蛋白質鑑定方法，進行生物學和免疫學純度的鑑定。主要包括分子量測定，胺基酸組成分析，抗原與相應抗體的特異性免疫電泳等。經上述檢驗證實，所提取的THP完全符合要求。
抗體製備
將人尿THP作為抗原，免疫紐西蘭白兔製備抗人THP抗體。方法:每隻兔每次用抗原量lmg，與等量完全Ferund佐劑混合，皮下、肌肉多點注射，每2周加強免疫1次，共3次。所得抗血清先經鹽沉澱法粗提，後經離子交換層析法純化。一純化的抗血清，經雙向免疫擴散法鑑定，結果顯示與相應抗原呈高度特異性結合呈現一條沉澱線。
