單鏈構象多態性 (Single-StrandConformationPolymorphism，SSCP)技術是分子遺傳標記中最常用的方法之一。它是隨著對人類基因組的研究而發展起來的用於檢測鹼基突變的技術。
基本介紹
- 中文名：單鏈構象多態性
- 外文名：SingleStrand Conformation Polymorphism
簡介,詳細內容,結論,
簡介
詳細內容
單鏈DNA片段呈複雜的空間摺疊構象，這種立體結構主要是由其內部鹼基配對等分子內相互作用力來維持的，當有一個鹼基發生改變時，會或多或少地影響其空間構象，使構象發生改變，空間構象有差異的單鏈DNA分子在聚丙烯醯胺凝膠中受排阻大小不同.因此，通過非變性聚丙烯醯胺凝膠電泳(PAGE)，可以非常敏銳地將構象上有差異的分子分離開.作者稱該方法為單鏈構象多態性 (Single-Strand Conformation Polymor-phism，SSCP)分析.
在PCR-SSCP技術中，進一步提高了檢測突變方法的簡便性和靈敏性.其基本過程是:①PCR擴增靶DNA;②將特異的PCR擴增 產物變性，而後快速復性，使之成為具有一定空間結構的單鏈DNA分子;③將適量的單鏈DNA進行非變性聚丙烯醯胺凝膠電泳;④最後通過放射性自顯影、銀染或溴化乙錠顯色分析結果.若發現單鏈DNA的遷移率與正常對照的相比發生改變，就可以判定該鏈構象發生改變，進而推斷該DNA片段中有鹼基突變.
該方法簡便、快速、靈敏，不需要特 殊的儀器，適合臨床實驗的需要.但它也有不足之處.例如，只能作為一種突變檢測方法，要最後確定突變的位置和類型，還需進一步測序;電泳條件要求較嚴格;另外，由於SSCP是依據點突變引起單鏈DNA分子立體構象的改變來實現電泳分離的，這樣就可能會出現當某些位置的點突變對單鏈DNA分子立體構象的改變不起作用或作用很小時，再加上其他條件的影響，使聚丙烯醯胺凝膠電泳無法分辨造成漏檢.
結論
儘管如此，該方法和其他方法相比仍有較高的檢測率.首先，它可以發現靶DNA片段中未知位置的鹼 基突變.Takao，經實驗證明小於300bp的DNA片段中的單鹼基突變，90%可被SSCP發 現，他認為現在知道的所有單鹼基改變絕大多數可用該方法檢測出來.另外，SSCP方 法可通過聚丙烯醯胺凝膠電泳將不同遷移率的突變單鏈DNA分離，並且還可以進一步提純.用這種方法可以最終從DNA序列水平上鑑別突變DNA片段.
