DHPLC

全稱

變性高效液相色譜分析（denaturing high performance liquid chromatography，DHPLC）

原理

在部分變性的條件下，通過雜合與純合二倍體在柱中保留時間的差異，發現DNA突變。異源雙鏈DNA與同源雙鏈DNA的解鏈特性不同，在部分變性條件下，異源雙鏈因有錯配區的存在而更易變性，在色譜柱中的保留時間短於同源雙鏈，故先被洗脫下來，在色譜圖中表現為雙峰或多峰的洗脫曲線。

優點

近年來建立並迅速發展的DHPLC是一種新型基因突變篩查技術，既能夠自動化、高通量進行，且除PCR之外，勿需進行PCR引物修飾、購買特殊試劑、檢測標記信號或作其它的樣品處理。而目前已有的許多DNA突變分析技術諸如單鏈構象多態性 (single-strand conformation polymorphism，SSCP) 、變性梯度凝膠電泳法(denaturing gradient gel electrophoresis, DGGE)等均不能滿足此要求。DHPLC具有高通量檢測、自動化程度高、靈敏度和特異性較高、檢測DNA片段和長度變動範圍廣、相對價廉等優點。與傳統的SSCP 、DGGE等方法相比，DHPLC有較多的優點。SSCP的結果受血樣質量、提取方法等因素的影響，並且需要跑膠、電泳；DGGE則需要標記引物，存在放射性污染，這兩種方法都比較費時費力。而DHPLC則高度自動化，可以自動取樣，檢測每個樣品只需要8分鐘左右。DHPLC與其他檢測DNA突變方法的最大不同在於，它能夠純化DNA片斷。當然，只能檢測雜合突變是DHPLC的不足之處，但是這可以利用混合的方法（即將純合突變樣品和野生型樣品混合）來解決。