《RAD6B在核苷酸剪下修復和皮膚腫瘤發生中作用的研究》是依託蘭州大學，由王德貴擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：RAD6B在核苷酸剪下修復和皮膚腫瘤發生中作用的研究
- 依託單位：蘭州大學
- 項目負責人：王德貴
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
DNA損傷後細胞會啟動相應的修復機制進行修復，修復功能的缺失會導致基因組的不穩定和突變的發生，從而導致腫瘤發生。DNA損傷後H1.2游離到細胞質並通過釋放細胞色素c啟動細胞凋亡。我們的前期工作證實了RAD6B和RNF168通過泛素化組蛋白H1.2在DNA雙鏈損傷修復中發揮作用，最新又發現它們在紫外線損傷後的核苷酸剪下修復NER中也發揮作用，並且RAD6B基因缺失細胞在DNA損傷後游離到細胞質的H1.2量相對較對照細胞少。所以我們推測RAD6B和RNF168泛素化修飾H1.2可能與損傷後H1.2與DNA解離有關。本研究計畫進一步探討RAD6B在NER修復通路中的作用及其上下游關係；明確RAD6B和RNF168泛素化修飾是否與H1.2和DNA解離並傳導凋亡信號到線粒體有關；通過基因敲除小鼠研究RAD6B在紫外線誘導皮膚腫瘤發生中的作用；探討P53在RAD6B缺陷小鼠皮膚腫瘤發生中的作用。
結題摘要
細胞在內源性或外源性因素作用產生DNA損傷後，迅速啟動相應的修復機制，而修復功能的缺失會引起基因組不穩定和突變，進而導致腫瘤發生。DNA損傷後，線粒體釋放細胞色素C啟動細胞凋亡。我們的前期工作證實了RAD6B和RNF168通過泛素化組蛋白H1.2參與DNA雙鏈損傷修復和紫外線損傷後的核苷酸剪下修復，並且RAD6B基因缺失細胞在DNA損傷後游離到細胞質的H1.2量較對照細胞少。為了深入研究RAD6B和RNF168泛素化修飾H1.2與損傷後H1.2與DNA解離的關係。本研究以RAD6B缺陷的轉基因小鼠和MEFS細胞為模型，首先探討RAD6B在NER修復通路中的作用及其上下游關係，發現RAD6B缺陷引起下游BRCA1等修復蛋白在損傷位點的招募明顯減弱，當野生型SBP-RAD6B轉染陽性細胞射線照射後能夠恢復 BRCA1在損傷位點的招募；進一步研究RAD6B和RNF168在NER通路中和其他E3和底物關係；在此基礎上，構建了質粒GFP-H1.2，以研究RAD6B和RNF168泛素化修飾是否與H1.2和DNA解離並傳導凋亡信號到線粒體有關，觀察到了胞漿內游離H1.2的含量有微弱增加，從線粒體釋放入胞漿的游離cyt.c的含量也有微弱增加；通過雜交RAD6B+/-P53+/-小鼠獲得同窩的RAD6B+/+P53+/-、RAD6B-/-P53+/-小鼠，並加以紫外線照射誘導損傷，研究RAD6B和P53在紫外線誘導皮膚腫瘤發生中的作用，發現RAD6B缺失導致小鼠更容易形成鱗狀細胞癌。綜上所述，RAD6B通過泛素化修飾組蛋白參與NER，RAD6B缺失導致細胞DNA損傷修復缺陷和基因組不穩定性增加，更容易形成腫瘤。本研究不僅揭示了RAD6B參與NER以維持細胞基因組穩定性中的重要作用和機制，也為皮膚腫瘤的研究和治療提供了新思路。
