PPAR-β在增生性瘢痕形成中的作用及其機制研究

《PPAR-β在增生性瘢痕形成中的作用及其機制研究》是依託中南大學，由楊興華擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：PPAR-β在增生性瘢痕形成中的作用及其機制研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：楊興華
• 依託單位：中南大學

項目摘要

前一個國家自然基金項目研究表明PPAR-β在傷口癒合中起重要作用。但PPAR-β是否對傷口癒合後瘢痕的形成產生影響尚不清楚。申請者近期研究發現，增生性瘢痕組織中PPAR-β高表達與增生性瘢痕的形成有密切關係。本項目在前期研究基礎上，擬通過建立兔增生性瘢痕模型及體外增生性瘢痕源性成纖維細胞實驗，採用免疫組織化學、realtime-PCR、Western Blot、siRNA干擾、基因轉染、免疫共沉澱等生物化學及分子生物學技術，從整體水平探討增生性瘢痕組織中PPAR-β表達變化與瘢痕發生和發展的關係，進一步通過細胞實驗研究PPAR-β、TGF-β1、c-Jun在成纖維細胞中的相互作用以及PPAR-β高表達的分子機理。開展本研究有助於闡明PPARβ在增生性瘢痕形成中的作用及其機制，從另一新的角度揭示增生性疤痕的發生和發展，豐富瘢痕形成機制，並有望發現瘢痕藥物干預新靶點，為臨床瘢痕防治提供新線索。

結題摘要

本項目通過動物模型、臨床樣本及細胞實驗，採用IHC、PCR、WB、RNAi、Transwell、流式細胞技術、co-IP等手段探討PPAR-β在增生性瘢痕(HS)形成中的作用機制。結果：1.PPARβ 在HS中高表達，PPARβ 表達量與瘢痕增生時相呈正相關。2.外用TGF-β1可明顯上調HS中PPARβ及I、III型膠原的表達。3.人HS中PPAR-β表達明顯高於正常皮膚。4. PPARβ通過調節其經典通路中Akt，ILK，PDK1的表達來影響HSF的增殖及遷移。5.c-Jun在HS及hHSF細胞中的表達明顯高於正常皮膚組織及HaCat細胞。6.c-Jun 通過上調 PPARβ 表達促進HSF增殖及遷移，7. c-Jun 通過下調Caspase8、9、3等抑制HSF凋亡。8. miR-138 與PPARβ間存在靶向作用關係，miR138直接作用於PPARβ的3’UTR區，抑制靶基因表達。9.上調miR-138 表達能抑制hHSF細胞增殖以及遷移，10.下調其表達則促進hHSF細胞增殖及遷移。11. TGF-β 1 下游信號分子 Smad3 與 c-Jun 之間無直接結合作用。結果表明：PPARβ在瘢痕形成過程中起重要作用，TGF-β 1可上調PPARβ表達，而PPARβ通過調節其經典通路中Akt，ILK，PDK1的表達而影響hHSF增殖及遷移等促進創面癒合及瘢痕形成。c-Jun 也通過上調 PPARβ 表達促進hHSF增殖及遷移，並通過下調Caspase8、9、3等抑制hHSF凋亡。TGF-β 1 及c-Jun 均上調PPARβ表達，並通過PPARβ經典通路促進hHSF的增殖及遷移。TGF-β 1及c-Jun 對PPARβ的調控是否存在競爭關係，PPARβ的表達上調及其經典通路下游分子是否對上游調控因子有負反饋調節作用等有待深入研究。研究還發現miR-138 直接作用於PPARβ的3’UTR區，上調或下調miR-138 表達能分別抑制或促進hHSF細胞增殖以及遷移，說明miR-138 與PPARβ間存在靶向作用關係，PPARβ的3’UTR區可作為瘢痕防治新靶點，並為HS防治新藥物的研發及靶向治療提供新線索。實驗中發現c-Jun與p-Smad3無直接結合關係，與我們預測的結果不符，可能因hHSF生物學功能變化或需要TGF-β1刺激或誘導有關，需要進一步實驗反覆驗證。