PAS染色法

PAS染色法

PAS染色法Periodic Acid-Schiff stain)在組織學上,主要用來檢測組織中的糖類。過碘酸把糖類相鄰兩個碳上的羥基氧化成醛基,再用Schiff試劑和醛基反應使呈現紫紅色。

基本介紹

  • 中文名:PAS染色法
  • 外文名:Periodic Acid-Schiff stain
  • 主要用來:檢測組織中的糖類
  • 又稱:過碘酸雪夫染色
  • 學科組織學
  • 領域組織學
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原理

PAS染色又稱過碘酸雪夫染色,糖原染色。一般用來顯示糖元和其它多糖物質。
原理:過碘酸能使細胞內的多糖乙二醇基氧化成二醛,再與Schiff氏液的無色品紅結合,紅色,定位於胞漿上。

方法

固定液

Carnoy固定液: 純酒精60 ml  冰醋酸10ml氯仿 30ml,也可以選用75%酒精

液配製

1) 過碘酸酒清夜配法:
過碘酸(HIO4·2H2O) 0.4g 95%酒精 35ml M/5醋酸鈉(2.72g+蒸餾水100ml) 5ml蒸餾水10ml。
保存於冰櫃內,用棕色瓶,可用兩周。
2)Schiff氏液:
0.5克鹼性品紅加入100毫升蒸餾水中,時時搖動三角瓶5分鐘,使之充分溶解。冷卻至50℃後過濾加入10毫升1N鹽酸,冷卻至25℃,加入0.5-1克偏重硫酸鈉,在室溫中至少靜置24小時,然後密封冰櫃保存。
3) Schiff氏酒精液配置 Schiff氏液 11.5ml  1N HCI 0.5ml  純酒精 23ml
4) 亞硫酸水 1%偏重亞硫酸鈉10ml  1N HCI 10ml  蒸餾水 180ml的樹膠溶解。
5)哈瑞或邁耶蘇木精

染色步驟

1. 石蠟切片脫蠟至水(細胞塗片,冰凍切片直接水洗);
2. 蒸餾水洗;
3. 過碘酸酒清夜10min;
4. 自來水沖洗10min;
5. Schiff氏液10min;
6. 流水沖洗5min;
7.用哈瑞蘇木精或邁耶蘇木精染核3min(細胞核染色過深可用鹽酸酒精分化);
8. 流水沖洗5min;
9. 常規脫水、透明、封固。

結果

PAS陽性為紅色,細胞核藍色。
PAS染色法

實驗效果

準備

1、10g/L過碘酸
2、Schiff染液:
DH2O 100ml
煮沸後,待片刻,加入鹼性品紅,振盪數分鐘使品紅溶解,冷至50℃加入1M的鹽酸20ml,混勻。待冷卻至25℃加入偏重亞硫酸鈉0.5g,混合,置於帶塞的棕色瓶中,放於暗處24小時,染液為無色,如為微紅則加活性炭1-2g,混合過濾,如過濾液仍有紅色,應再加少許活性炭,時紅色完全被吸收為止。製成後置於棕色瓶內保存在冰櫃備用,如變為紅色,則不能使用。
4、蘇木素液:
蘇木素 0.9g
95%乙醇 10ml
銨(鉀)明礬 20g
DH2O 200ml
將蘇木素溶於95%的乙醇,鉀明礬溶於水(可加熱),然後將蘇木素液加入明礬液中混合,用強火煮沸後加氧化汞0.5g,迅速攪拌,成深紫色,迅速移入冷水中,次日過濾,臨用時取此液95ml加冰醋酸5ml,可使細胞著色清楚。

方法

1、將新鮮血片或骨髓片用95%乙醇固定10分鐘;
2、10g/L過碘酸液作用20分鐘;
3、DH2O洗滌幾次,晾乾;
4、Schiff染液,60分鐘;
5、用自來水洗滌15分鐘(細水長流沖洗);
6、蘇木素染液10分鐘;
7、自來水沖洗15分鐘,待乾。

結果

陽性反應,胞漿呈紅色,陰性反應,胞漿呈無色;在正常血片中RBC不染色;PLT染成深紅色;中性粒細胞胞漿染成紅色或深紅色,有些細胞有陽性顆粒;單核細胞的胞漿染成淡紅色,可含有細小或粗大陽性顆粒;少數淋巴細胞的胞漿內含有少許小的淡紅色或紅色顆粒;正常骨髓的幼稚細胞和有核RBC都不染色;巨核細胞的胞漿內呈彌散紅色或深紅色。巨核細胞的胞漿內呈彌散紅色或深紅色。

套用

隨著醫學實驗技術的發展,糖原染色套用的範圍更加廣泛,如用以證明與鑑別細胞內空泡狀的性質 ,心肌病變及其他心血管疾病的診斷 ,糖原累積病診斷和研究 ,糖尿病的診斷和研究 ,用於某些腫瘤的診斷等。除用於糖原的鑑定和黏液的顯示外 ,還可以觀察腎小球基底膜 、結腸杯狀細胞 中性黏液物質 、阿米巴滋養體和黴菌的著色。臨床診斷、分類和治療提供 了重要的依據。

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