《OPG抑制破骨細胞分化成熟的信號轉導機制》是依託揚州大學，由劉宗平擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：OPG抑制破骨細胞分化成熟的信號轉導機制
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：劉宗平
- 依託單位：揚州大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
通過OPG/RANK/RANKL調控途徑誘導大鼠破骨細胞的形成和活化，用倒置顯微鏡觀察細胞形態、檢測破骨細胞TRAP和MMP-9表達、掃描電鏡觀察象牙片吸收陷窩等鑑定破骨細胞活性。在培養液中加入不同濃度的OPG（10.0、20.0、30.0、50.0ng/ml）處理，在培養過程的不同時間通過免疫組化法、免疫印跡法和雷射共聚焦顯微鏡等檢測破骨細胞NF－κB、MAPK（ERK－MAPK途徑、JNK/SAPK－MAPK途徑和p38－MAPK途徑）及Ca2＋信號轉導通路激活過程中關鍵信號分子的表達；在此基礎上，分別用信號轉導抑制劑（NF－κB特異性抑制劑、ERK抑制劑、JNK抑制劑、p38－MAPK抑制劑、Ca2＋信號轉導抑制劑）處理細胞後檢測這些關鍵信號分子的表達，確定這些信號轉導通路是否調控OPG抑制大鼠破骨細胞的分化成熟，並揭示其調控過程的可能機制。
結題摘要
通過OPG/RANK/RANKL調控途徑誘導大鼠破骨細胞的形成和活化，用倒置顯微鏡觀察細胞形態、檢測破骨細胞TRAP和MMP-9表達、掃描電鏡觀察象牙片吸收陷窩等鑑定破骨細胞活性。在培養液中加入不同濃度的OPG（10.0、20.0、30.0、50.0、100ng/ml）處理，在培養過程的不同時間檢測破骨細胞NF－κB、MAPK（ERK－MAPK途徑、JNK/SAPK－MAPK途徑和p38－MAPK途徑）信號轉導通路激活過程中關鍵信號分子的表達；在此基礎上，分別用信號轉導抑制劑（NF－κB特異性抑制劑、ERK抑制劑、JNK抑制劑、p38－MAPK抑制劑）處理細胞後檢測這些關鍵信號分子的表達。結果表明，（1）體外培養鴨胚破骨細胞1-7天，30ng/mL、100ng/mL OPG組TRAP陽性細胞數均顯著或極顯著少於對照組（P＜0.05或P＜0.01）；第11天 30ng/mL OPG組TRAP陽性細胞數與對照組差異不顯著（P＞0.05），而第18天 30ng/mL OPG組TRAP陽性細胞數顯著多於對照組（P＜0.05或P＜0.01）；OPG能夠劑量依賴性抑制鴨胚OC的骨吸收活性。（2）OPG可使RAW264.7細胞誘導分化為破骨細胞過程中NF-κB65表達量降低，而使細胞IκBα、IκBα表達量增加；100µM PDTC阻斷NF－κB通路後，上述指標的變化與OPG濃度之間無顯著關係，表明OPG抑制破骨細胞形成過程中NF－κB信號通路發揮了調控作用。（3）在M-CSF + RANKL誘導作用下，15分鐘內RAW264.7細胞中MAPK家族中的 p38-MAPK、JNK-MAPK、ERK-MAPK三條信號轉導通路均被激活。而OPG能夠下調p38-MAPK、JNK-MAPK、ERK-MAPK三種信號蛋白磷酸化水平，隨OPG濃度升高及OPG作用時間延長，該抑制作用愈加明顯。加入特異性MAPK信號轉導通路抑制劑後檢測上述各信號蛋白表達，進一步證實了MAPK信號途徑參與破骨細胞分化過程。
