《OPG/RANKL/RANK信號系統對蛋雞髓質骨形成的調控機理研究》是侯加法為項目負責人，南京農業大學為依託單位的面上項目。
基本介紹
- 中文名：OPG/RANKL/RANK信號系統對蛋雞髓質骨形成的調控機理研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：侯加法
- 依託單位：南京農業大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
髓質骨是雌禽所特有的結構，其主要功能是為蛋殼鈣化提供鈣質。髓質骨的形成與髓質骨重建是一個複雜而有序的代謝過程，受多種骨代謝調節激素和細胞因子的調控。其中OPG/RANKL/RANK共同所形成的信號系統介導了這些激素和細胞因子在髓質骨形成中所必須的細胞-細胞間信號傳導，但該系統調控的髓質骨形成的作用途徑和分子機理至今仍不詳。本研究通過體外細胞培養，研究OPG、RANKL對髓質骨成骨細胞和破骨細胞增殖、分化、凋亡，以及細胞分泌功能的影響，並套用分子生物學技術及原位雜交來研究OPG、RANKL作用下，通過觀察蛋雞髓質骨形成中骨組織功能基因的表達變化、骨代謝標誌物、骨放射密度、骨顯微、超微結構變化，揭示OPG/RANKL/RANK信號系統對髓質骨形成的調控作用及分子機理，為蛋雞骨質疏鬆症以及畜禽骨骼與關節疾病的病因學、病理學研究提供理論依據。
結題摘要
骨保護素 (oeteoprotegerin，OPG) 是一種能阻斷RANKL與RANK結合，抑制破骨前體細胞分化、成熟破骨細胞活性並誘導其凋亡的分泌型糖蛋白。體內調節骨代謝的許多激素和細胞因子最終通過調節OPG/RANKL的表達而發揮作用。鑒於OPG在骨代謝中的重要調節作用，本項目旨在構建真核表達質粒pcDNA3.1(+)-chOPG；體外試驗，通過脂質體介導轉染雞胚成纖維細胞，表達外源chOPG蛋白，觀察OPG和RANKL蛋白對雞胚破骨細胞功能的影響，同時利用雞胚BMSCs細胞誘導培養成骨細胞，觀察chOPG對雞胚BMSCs誘導的成骨細胞功能的影響；體內試驗，通過肌肉注射蛋雞骨骼肌，探討質粒pcDNA3.1(+)-chOPG在蛋雞體內的分布、外源chOPG蛋白的表達和對主要器官組織的病理學變化，以及對蛋雞生化指標、生產性能和骨骼代謝的影響。結論：成功構建了真核表達質粒pcDNA3.1(+)-chOPG，質粒轉染CEFs後能夠表達抑制破骨細胞生物學活性的外源chOPG蛋白，適當劑量（200 μg）的外源質粒pcDNA3.1(+)-chOPG在不影響產蛋量的情況下，可改善骨代謝，主要器官即心、肝、脾、腎、注射部位骨骼肌組織未發現明顯的病理學變化，為進一步研究籠養蛋雞骨質疏鬆發生機制提供新的思路。
