O-F試驗指葡萄糖氧化發酵試驗。
在細菌鑑定中，糖類發酵產酸是1項重要依據。細菌對糖類的利用有2種類型：1種是從糖類發酵產酸，不需要以分子氧作為最終受氫體，稱發酵型產酸；另一種則以分子氧作為最終受氫體，稱氧化型產酸。前者包括的菌種類型為多數。氧化型產酸量較少，所產生的酸常常被培養基中的蛋白腖分解時所產生的胺所中和，而不表現產酸。為此，Hugh和Leifson提出一種含有低有機氮的培養基，用以鑑定細菌從糖類產酸是屬氧化型產酸或發酵型產酸。這一試驗廣泛用於細菌鑑定。一般用葡萄糖作為糖類代表。也可利用這一基礎培養基來測定細菌從其他糖類或醇類產酸的能力。
（1）接種 ：以18－24h的幼齡菌種，穿刺接種在上述培養基中，每株菌接4管，其中2管用油封蓋（凡士林：液體石蠟=1：1混合後滅菌），約加0.5－1厘米厚，以隔絕空氣為閉管。另2管不封油為開管，同時還要有不接種的閉管作對照。適溫培養1、2、4、7天觀察結果。
（2）結果觀察：氧化型產酸――僅開管產酸，氧化作用弱的菌株往往先在上部產鹼（1－2d），後來才稍變酸。發酵型產酸則開管及閉管均產酸，如產氣，則在瓊脂柱內產生氣泡。
