《NK/NKT細胞在HBV感染肝細胞癌發生髮展中的作用及其分子機制》是依託中國科學技術大學，由陳永艷擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：NK/NKT細胞在HBV感染肝細胞癌發生髮展中的作用及其分子機制
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：陳永艷
- 依託單位：中國科學技術大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
HBV感染肝臟慢性炎症損傷是導致肝癌發生的重要因素，我們已有的研究表明肝臟NK/NKT細胞天然免疫應答是導致HBV感染肝臟易發生急慢性肝炎、肝纖維化的重要機制。故本研究擬在已有的研究基礎上進一步探索肝臟NK/NKT細胞在HBV感染肝臟惡性腫瘤發生髮展中的作用及其分子機制。通過免疫刺激劑Con A、PolyI:C或化學毒物CCl4、DEN誘導HBV轉基因小鼠急慢性炎症過程，進而誘導肝細胞癌的發生，動態觀察HBV感染肝臟的病理學變化及多種生化指標，尋找肝細胞惡性轉化發生的動力學特徵及關鍵時間節點。通過基因缺陷小鼠，細胞清除及轉輸等實驗手段驗證肝臟NK/NKT細胞在該過程中的關鍵作用，並進一步監測尋找NK/NKT細胞行駛天然免疫應答的關鍵分子（細胞因子、趨化因子、天然免疫識受體、殺傷受體/分子）及其與肝細胞惡變之間的關係，從而揭示NK/NKT在 HBV感染肝細胞癌變與腫瘤形成過程中的重要機制。
結題摘要
HBV感染肝臟慢性炎症損傷是導致肝癌發生的重要因素，而固有免疫應答在其中的作用尚不清楚。本研究旨在探索肝臟NK/NKT 細胞介導的肝臟炎性損傷在HBV感染肝臟惡性腫瘤發生髮展中的作用及其分子機制。通過低劑量Poly I:C（3μg/g body weight）刺激4-5月齡HBs-Tg小鼠（C57BL/6J-TgN (AlblHBV) 44Bri）8周（2次/周），結果發現肝臟呈現慢性炎症狀態，表現為血清ALT/AST水平的上升，肝臟炎性細胞的浸潤及膠原沉積。刺激6個月後，100% HBs-Tg小鼠發生HCC；對照組12-13月齡HBs-Tg小鼠僅16.7%自發腫瘤，24-25月齡約40%自發腫瘤。生存期亦表明Poly I:C刺激後HBs-Tg小鼠死亡率顯著上升。WT小鼠中，低劑量Poly I:C刺激不能誘導肝臟炎症的發生，亦不會形成腫瘤。HBs-Tg小鼠在Poly I:C（1st 以及16th ）刺激後肝細胞凋亡及增殖均顯著增多；肝臟NK和NKT細胞比例、數量顯著上升，高表達FasL, TRAIL, NKG2D, CD107a以及IFN-γ。利用PK136抗體清除HBs-Tg小鼠體內NK和NKT細胞，Poly I:C刺激後血清ALT顯著降低，並伴隨血清IFN-γ顯著降低，6個月後小鼠不發生HCC。進一步利用HBs-Tg-IFN-γ-/-小鼠，Poly I:C刺激後其血清ALT顯著低於HBs-Tg小鼠，且未見HCC的發生，證實NK和NKT細胞的作用依賴於IFN-γ。利用尾靜脈高壓注射Plive-IFN-γ質粒的方式，靶向肝臟表達IFN-γ可誘導HBs-Tg小鼠發生明顯的肝臟炎性損傷，並在6個月之後全部發生HCC。另外，在已發生HCC的HBs-Tg小鼠中肝臟NK和NKT細胞表型發生顯著變化，低表達NKG2D、Trail；高表達NKG2A、TIGIT；IL-10分泌水平顯著上調。同時研究發現在TLR2-/-小鼠中IL-18誘導MDSC細胞的聚集進而抑制T細胞的抗腫瘤功能是導致DEN誘導腫瘤更為嚴重的關鍵機制。在慢性B型肝炎患者中CD3brightCD56+ T細胞的出現是導致肝臟慢性炎症發生髮展的重要原因。該課題研究揭示了固有免疫應答誘導的肝臟慢性炎症在HBV感染肝臟HCC發生髮展中的重要作用及其分子機制，為HBV感染性疾病的防治提供重要的理論依據。
