《重型B型肝炎中NK細胞的趨化機制及其靶向干預研究》是依託華中科技大學，由陳韜擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：重型B型肝炎中NK細胞的趨化機制及其靶向干預研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：陳韜
- 依託單位：華中科技大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
在B型肝炎病毒所致的重型肝炎肝損傷中，免疫損傷機制占有重要的地位，儘管其生物學過程複雜，但免疫細胞趨化募集至肝臟為其首要條件。我們的前期研究首次在HBV感染所致的重型肝炎患者以及MHV-3誘導的暴髮型肝炎小鼠模型中闡述了NK細胞在肝細胞損傷中重要地位：隨著病毒感染後肝臟損傷的進展，骨髓、脾臟及外周血中的NK細胞有向肝臟募集的趨勢，這些募集至肝臟中的NK細胞通過Fas-FasL和NKG2D-NKG2DL途徑損傷肝細胞，耗竭動物模型體內的NK細胞可以明顯改善其生存率。據此我們提出NK細胞趨化至肝臟是病毒性重型肝炎肝損傷的關鍵因素，通過對NK細胞趨化的靶向干擾可以緩解肝臟損傷。在新近的動物模型研究中，我們通過基因晶片初步篩選出CCR1和CCR5可能是NK細胞募集至肝臟的功能性趨化因子受體，通過進一步研究有望揭示該疾病中NK細胞的趨化機制，並為疾病靶向干預提供實驗依據和治療策略。
結題摘要
自然殺傷（NK）細胞在B肝病毒感染導致的肝衰竭的發病機制中發揮了重要的作用。在前期研究中我們發現，在MHV-3介導的小鼠暴發性肝炎模型中，肝臟NK細胞的比例和數量顯著增加，在感染48h達到峰值，相反在脾臟和骨髓，NK細胞比例和數量在感染後均顯著減少。表明MHV-3感染後，NK細胞從脾臟，骨髓和外周血遷移募集至肝臟。但NK細胞趨化募集的具體機制仍不明確。 首先，我們利用基因晶片技術，篩選出具有差異表達的肝臟NK細胞趨化因子受體CCR5、CCR1、CXCR3以及CXCR4。其後的Real-time PCR實驗表明，CCR5較其餘三種受體表達水平發生了更為顯著及平穩的變化。隨後，流式細胞術檢測發現，MHV-3感染後，CCR5+NK細胞在肝臟中的百分率顯著增加，與正常對照組相比，在感染後24小時達到高峰。與之相反，CCR5+NK細胞的脾臟、骨髓及外周血的數量均在感染後12或24小時達到峰值，隨後下降。ELISA法用於檢測MIP-1α，MIP-1β和RANTES在肝臟中的表達，在感染後均逐漸上升，並於感染後72小時達到峰值。免疫組化染色亦證明感染後72小時MIP-1α，MIP-1β和RANTES在肝臟中的表達量最高。感染後的肝細胞MIP-1α，MIP-1β，RANTES mRNA的表達呈上升趨勢，至72小時分別上升269倍，2015倍和189倍。Transwell細胞趨化實驗證明，MHV-3感染的肝細胞能趨化脾臟NK細胞，不僅這種趨化效應能被抗CCR5的單克隆抗體阻斷，而且可以被抗MIP-1α，抗MIP-1β，和抗-RANTES單克隆抗體分別阻斷。MHV-3感染的肝細胞能趨化脾臟NK細胞，同時CCR5和其相應的趨化因子（MIP-1β，RANTES）在此趨化過程中發揮了重要作用。過繼轉移實驗證實將脾臟CCR5阻斷的NK細胞經尾靜脈回輸至MHV-3感染已將NK細胞耗竭的Balb/cJ小鼠後，可將生存時間延長至84-90h。HE染色證實過繼實驗24小時後，CCR5+NK過繼組大量炎性細胞浸潤和肝細胞死亡，血清ALT/AST水平均高於CCR5-NK過繼組，肝臟NK細胞絕對計數亦顯著增高。 本研究表明，CCR5及其配體MIP-1β和RANTES在 MHV-3誘導的肝損傷中對NK細胞向肝臟的趨化募集發揮了重要的作用，可能成為病毒性肝衰竭的潛在干預靶點。
