《NK細胞活化性受體NKP46在慢性HBV感染中的作用及其機制研究》是依託吉林大學，由李婉玉擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：NK細胞活化性受體NKP46在慢性HBV感染中的作用及其機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：李婉玉
- 依託單位：吉林大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
B型肝炎慢性化及治療應答個體化的機制未完全明確，仍為研究的熱點和難點。HBV感染後疾病譜複雜且免疫應答存在異質性。近期研究表明天然免疫特別是NK細胞不僅在宿主防禦HBV感染的過程中起著重要作用，並且可以抑制HBV複製。我們前期通過分析慢性HBV感染的不同免疫階段NK細胞表型、受體及功能是否存在差別，發現活化性受體NKP46在不同組間存在差別，NKP46與HBV DNA、ALT負相關，並且確定了NKP46作為NK細胞的主要殺傷裂解受體，與殺傷功能直接相關。擬在前期研究基礎上，採用CBA Flex法分析慢性HBV感染者NKP46信號途徑基因表達是否異常並且套用核苷類似物抗病毒治療後對信號途徑基因表達是否有影響，利用流式細胞術檢測慢性HBV感染者肝臟內NKP46表達以及通過動物實驗體內阻斷NKP46觀察其抗病毒效應。從天然免疫角度闡明HBV感染慢性化機制，為需找HBV持續感染治療靶點奠定基礎。
結題摘要
慢性B型肝炎是一個全世界範圍的健康問題，其慢性化以及治療應答個體化的機制未完全明確，仍為研究的熱點及難點。HBV感染後疾病譜複雜且免疫應答存在異質性。天然免疫的效應細胞如NK細胞為病毒感染的第一道防線。許多發現促使我們針對B型肝炎的NK細胞進行研究。首先，肝臟內淋巴細胞30-50%為NK細胞；其次，慢性B型肝炎抗病毒藥Peg干擾素α，為NK細胞有效的激活劑。研究表明NK細胞參與HBV感染後的免疫應答，HBV逃逸NK細胞的清除作用與病毒持續性感染密切相關。NK 細胞的功能受抑制性受體和活化性受體之間的動態平衡所調節。我們前期通過分析慢性HBV感染的不同免疫階段NK細胞表型、活化性和抑制性受體以及功能是否存在差別，發現活化性受體NKP46在不同組間存在差別，NKP46與HBV DNA、ALT負相關，並且確定了NKP46作為NK細胞的主要殺傷裂解受體，與殺傷功能直接相關。在前期體外通過外周血研究結果基礎上，通過肝組織與外周血結合，體內與體外結合進一步針對NKP46在慢性HBV感染進行深入研究：1、體外：（1）NKP46信號途徑分析：套用Illumina Human WG-6 v3.0(Illumina,San Diego, CA, USA)全基因組表達晶片分析慢性HBV感染者NKP46信號途徑基因表達，包括NK細胞信號通路、ERK/MARP信號通路以及鈣離子信號通路，結果發現不同分組之間基因表達沒有差別；（2）肝組織中NKP46的表達：套用免疫組化檢測慢性HBV感染者肝組織NKP46表達，結果發現慢性HBV感染者NKP46表達比正常對照組升高。2、體內：為了證明阻斷NKP46後的體內抗病毒效應，我們通過高壓注射HBV質粒pAAV/HBV1.2建立HBV感染小鼠模型，分別用抗NKP46抗體和同型抗體IgG進行阻斷，結果發現阻斷NKP46後HBV感染小鼠血清中HBV DNA下降減少，並且進一步套用免疫組化檢測小鼠肝組織HBcAg的表達，結果發現阻斷NKP46後HBcAg表達增高，這些結果表明體內阻斷NKP46的識別導致NK細胞清除病毒的能力減弱。本研究可為進一步闡明HBV感染的慢性化機制提供理論依據；可能改進HBV抗病毒治療策略，如NKP46作為抗病毒治療的靶點，進而調整治療方案；為抗NKP46在未來是否可擬補干擾素及核苷類似物的不足提供實驗室數據。
