《MicroRNA-10a調控神經膠質瘤生長及轉移的機制研究》是依託南開大學，由顏艷擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：MicroRNA-10a調控神經膠質瘤生長及轉移的機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：顏艷
- 依託單位：南開大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
微小RNA（miRNA）作為一種轉錄後調節因子，在腫瘤的發生髮展及轉移過程中發揮重要作用。本項目前期研究發現miR-10a在神經膠質瘤組織中較癌旁組織相比，表達水平明顯增高，並首次發現miR-10a可在體外促進神經膠質瘤細胞生長及轉移能力，並套用mRNA表達譜晶片技術結合生物信息學分析，篩選得到了miR-10a的12個可能靶基因，包括與腫瘤直接相關的E2F轉錄因子7（E2F7），酪氨酸激酶受體A8（EphA8）等。本項目擬通過GFP融合報告載體技術結合實時定量PCR和Western印跡的方法，系統分析miR-10a作用的直接靶基因及其可能作用方式，並利用RNA干擾及過表達技術深入研究這些靶基因對神經膠質瘤惡性表型的影響，以期闡明miR-10a促進膠質瘤發生髮展的分子機制，為理解神經膠質瘤發生和開發膠質瘤早期診斷試劑及有效治療藥物提供實驗線索和理論依據。
結題摘要
本項目在前期發現miR-10a在神經膠質瘤組織中高表達的基礎上，旨在進一步探討miR-10a對膠質瘤細胞惡性表型的影響，包括細胞活性、細胞增殖、細胞遷移及侵襲能力。並通過生物信息學分析篩選miR-10a的靶基因，而後利用GFP融合報告載體技術結合實時定量PCR及Western blot方法進一步驗證miR-10a對其靶基因的調控方式，並利用細胞表型實驗確定靶基因對細胞惡性表型的影響，以闡明miR-10a作用於神經膠質瘤的分子機制。 通過研究我們證實與癌旁組織相比，miR-10a在膠質瘤組織中的表達水平明顯增高，且在高分級瘤組織中的表達水平與低分級組織相比也明顯增高。細胞表型實驗結果顯示，miR-10a在體外可增強膠質瘤細胞U251及U87的細胞活性、增殖、遷移及侵襲能力。荷瘤鼠模型體內實驗證實miR-10a在體內可促進膠質瘤的增殖。通過生物信息學分析結合實時定量PCR及Western blot方法，最終確立EphA8為miR-10a的靶基因。接下來通過RNA干擾技術證實敲降EphA8的表達同樣可增強U251及U87的細胞活性、增殖、遷移及侵襲能力。挽救實驗結果顯示過表達EphA8可抵消miR-10a對膠質瘤細胞惡性表型的影響,進一步證實EphA8是miR-10a的直接作用靶基因。最後，通過檢測miR-10a及EphA8的表達水平變化時上皮及間皮細胞表型的分子標誌物的蛋白水平變化證明EMT參與了miR-10a及EphA8對膠質瘤細胞遷移及侵襲的調控過程。同樣，敲降miR-10a及過表達EphA8均可使Wnt信號通路下游的相關蛋白Bcl-2、c-myc及c-Jun的表達水平增高，證實miR-10a及EphA8通過調控Wnt信號通路而影響膠質瘤細胞的增殖能力。 本研究確立了miR-10a對膠質瘤發生髮展的影響及其分子機制，為理解神經膠質瘤的發生和開發膠質瘤早期診斷試劑及有效治療藥物提供實驗線索和理論依據。
