《K-RAS活性調節在DJ-1促進胰腺癌侵襲中的作用及機制研究》是依託上海交通大學，由何相宜擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：K-RAS活性調節在DJ-1促進胰腺癌侵襲中的作用及機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：何相宜
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
高轉移性和強侵襲性是胰腺癌重要特徵。我們前期研究發現DJ-1在胰腺癌中高表達，且與腫瘤T分期及預後相關；並證實DJ-1通過激活ERK通路,上調uPA表達，促進胰腺癌侵襲轉移；而ERK上游的RAS活性也受DJ-1調節。鑒於K-RAS在胰腺癌中高突變率，與胰腺癌密切相關，我們推測DJ-1通過增加K-RAS活性激活ERK-uPA-侵襲級聯反應。故為明確DJ-1促胰腺癌侵襲作用是否依賴K-RAS，我們擬在敲低DJ-1表達細胞中轉染組成型激活K-RAS，在高表達DJ-1細胞中轉染siRNA抑制K-RAS活性，觀察ERK通路及侵襲變化；其次為探討DJ-1調節K-RAS活性機制，我們將檢測DJ-1與K-RAS物理結合方式與位點、檢測改變DJ-1表達後K-RAS在細胞內膜定位、脂質修飾水平及K-RAS激活和抑制蛋白表達量等變化。該研究為靶向DJ-1治療胰腺癌提供理論依據，為尋找靶向K-RAS提供有效策略。
結題摘要
高轉移性和強侵襲性是胰腺癌重要特徵。我們前期研究發現DJ-1在胰腺癌中高表達，且與腫瘤T分期及預後相關；並證實DJ-1通過激活ERK通路,上調uPA表達，促進胰腺癌侵襲轉移。本項目就DJ-1引起ERK通路上游即RAS的激活做了深入的研究，並據此聯繫臨床實際探索這一機制對胰腺癌厄羅替尼的增敏效應。 結果主要發現：（1） 干擾DJ-1表達後RAS各個類型亞型（KRAS、NRAS、HRAS）其活性均下降。（2）干擾DJ-1後各個RAS的mRNA表達水平略有減低。（3）干擾DJ-1抑制干擾DJ-1後細胞膜Kras/胞漿水平明顯減低（減低44.1%，P＜0.001,N=3），HRAS和NRAS變化不明顯。提示DJ-1可能參與K-RAS的膜轉位。免疫螢光也證實幹擾DJ-1 對KRAS在細胞內分布變化。（4）研究提示干擾DJ-1後K-Ras的降解及合成速率影響未見明顯變化。（5）干擾DJ-1後RASAL1表達明顯升高，RASAL1能催化RAS-GTP水解失活。（6）干擾DJ-1減低K-RAS表達，抑制了RAS和K-RAS活性,可增強厄洛替尼對胰腺癌細胞的抑制增殖、促進凋亡的作用。本項目研究揭示了DJ-1調節KRAS活性具體機制可能通過增加KRAS的膜轉位、mRNA表達，上調GAPs：RASAL1。 KRAS是目前胰腺癌的抗EGFR治療耐藥性重要下游分子，KRAS的狀態影響了抗EGFR治療的敏感性，我們的研究也顯示抑制DJ-1可以增強抗EGFR抑制劑的療效。因此，以上研究成果有望為胰腺癌的分子靶向治療提供理論依據，尤其是為開發抗KRAS治療藥物，和聯合抗EGFR治療策略提供理論基礎。
