K-RAS驅動的Lin28B/let-7通路維持PCSCs自我更新及其機制

《K-RAS驅動的Lin28B/let-7通路維持PCSCs自我更新及其機制》是依託江蘇大學，由張尤歷擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：K-RAS驅動的Lin28B/let-7通路維持PCSCs自我更新及其機制
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：張尤歷
• 依託單位：江蘇大學

項目摘要

靶向干預胰腺癌幹細胞（PCSCs）生長已成為胰腺癌治療的重要策略之一。研究表明突變的K-RAS可以維持PCSCs的乾性和驅動其自我更新，且多能性基因Lin28B可調控K-RAS的翻譯過程。然而，K-RAS/Lin28B間相互調控的分子機制及其在PCSCs生長中的作用尚需進一步闡明。基於本課題組前期研究結果和生物信息學的分析，我們推測K-RAS的下游節點激酶PKC可能介導了Lin28B磷酸化，促進了其核轉位，核內Lin28B抑制let-7的成熟，從而提高其下游靶分子TET3翻譯水平，維持乾性基因OCT4、NANOG等啟動子區CpG 島的低甲基化狀態，形成一個正反饋調節環路促進胰腺癌幹細胞的生長。本項目擬通過體內、外實驗驗證上述假說，旨在揭示K-RAS/lin28B/TET3通路調控的分子機制及其在胰腺癌幹細胞生長中的作用，研究結果將為靶向胰腺癌幹細胞的治療策略提供理論依據。

結題摘要

靶向干預胰腺癌幹細胞（PCSCs）生長已成為胰腺癌治療的重要策略之一。 將胰腺癌組織與癌旁組織中Lin28B的mRNA進行比較，發現癌組織中的mRNA表達明顯高於癌旁組織。Lin28B可以促進胰腺癌細胞的遷移、增殖能力。通過基因晶片免疫組化實驗發現，在Lin28B表達低的標本中其TET3的表達也低，而在Lin28B表達高的標本中其TET3表達也較高。在胰腺癌細胞中Lin28B促進TET3的蛋白和mRNA表達，同時TET3也促進Lin28B的蛋白和mRNA表達。在胰腺癌細胞中轉染let7i的類似物後，Lin28B 3’UTR螢光素酶質粒產生的螢光強度下降，而在Lin28B 3’UTR突變型質粒中螢光強度未有明顯下降，同時TET3 3’UTR螢光素酶質粒產生的螢光強度下降，而在TET3 3’UTR突變型質粒中螢光強度未有明顯下降。通過挽救實驗發現，在胰腺癌細胞中過表達Lin28B並干擾TET3，SOX2、OCT4、NANOG等蛋白表達均較少，細胞增殖能力、細胞克隆形成能力、細胞侵襲能力減弱；同時在胰腺癌細胞中干擾Lin28B並過表達TET3， SOX2、OCT4、NANOG等蛋白表達均增加，細胞增殖能力、細胞克隆形成能力、細胞侵襲能力增強。運用IP技術發現PKCβⅠ亞型蛋白與Lin28B蛋白可以相互結合。核漿分離實驗以及免疫螢光實驗證實在胰腺癌細胞中下調K-RAS表達可以抑制Lin28B的核轉位。核漿分離實驗以及免疫螢光實驗證實PKCβⅠ與Lin28B的S243位點結合作用最強。 K-RAS 的下游節點激酶PKCβⅠ介導了Lin28B 的S243位點磷酸化，促進了其核轉位，核內Lin28B 抑制let-7 的成熟，從而提高其下游靶分子TET3 翻譯水平，維持乾性基因SOX2、OCT4、NANOG 表達，形成一個正反饋調節環路促進胰腺癌幹細胞的生長。K-RAS/lin28B/TET3 通路調控的分子機制及其在胰腺癌幹細胞生長中的作用，研究結果將為靶向胰腺癌幹細胞的治療策略提供理論依據。