《IRF8對心臟重構的影響及其機制》是依託武漢大學，由李紅良擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：IRF8對心臟重構的影響及其機制
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：李紅良
- 依託單位：武漢大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
心臟重構是各種心血管疾病所致心力衰竭發生髮展的核心機制。干擾素調節因子-8（IRF-8）是天然免疫信號網路中的關鍵分子，與增值、凋亡、纖維化、炎症和血管新生相關的信號通路及轉錄因子關係密切，但目前尚無關於IRF-8對心臟重構的作用及其機理的相關報導。本項目研究分為兩部分，第一部分是運用IRF-8基因敲除小鼠及心臟特異性轉基因小鼠研究IRF-8對小鼠心肌肥厚和心肌梗死模型誘導的心臟重構的影響及其分子機理。第二部分是運用分子生物學技術和原代培養的小鼠心肌細胞和小鼠心肌成纖維細胞，在細胞水平探討IRF-8對心肌細胞肥大、凋亡和炎症、心肌成纖維細胞的增值和膠原合成的影響及其可能的分子機制。力圖明確IRF-8對心臟重構的影響，闡明該基因對心臟重構的根本機制，為心臟重構的防治提供新的分子靶點。
結題摘要
心臟重構是各種心血管疾病所致心力衰竭發生髮展的核心機制。干擾素調節因子8（IRF8）是天然免疫信號網路中的關鍵分子，本項目意在闡明干擾素調節因子8（IRF8）對心臟重構的影響及其具體機制。通過運用IRF8全身性基因敲除小鼠、心臟特異性IRF8條件性敲除小鼠、心臟特異性IRF8轉基因小鼠、持續激活的NFATc1轉基因小鼠、IRF8與NFATc1雙轉基因小鼠等多種基因工程小鼠，並給予主動脈縮窄術刺激誘導心臟重構模型，綜合評價IRF8對心臟重構的影響。另外，通過高通量晶片篩選、螢光素酶報告、免疫印跡、免疫螢光、免疫共沉澱技術以及GST-Pull down檢測等方法闡明IRF8影響心臟重構的具體機制。系列實驗結果表明，IRF8的蛋白表達量在擴張型心肌病和肥厚型心肌病患者心肌組織、壓力負荷誘導的小鼠肥厚性心肌組織以及Ang II或PE誘導的大鼠原代心肌細胞中顯著下降。在體外培養的原代心肌細胞中通過腺病毒介導的IRF8過表達或干擾內源性的IRF8表達，並給予1 μM的Ang II刺激48小時後發現IRF8過表達顯著抑制心肌細胞的肥大，而干擾IRF8表達則顯著促進Ang II誘導的心肌細胞肥大。通過螢光素酶報告基因晶片篩選的手段發現，IRF8能顯著抑制轉錄因子NFAT的轉錄活性，進一步的機制研究表明，IRF8能與NFATc1相互作用，抑制NFATc1的去磷酸化及入核轉運，從而抑制NFATc1對下游促心臟重構基因（如BNP、MCIP1.4等）的調控，IRF8的IAD1結構域介導了與NFATc1的相互作用，NFATc1的TAD-A介導其與IRF8相結合。當給予IRF8基因敲除小鼠以NFAT的抑制劑VIVIT處理後，壓力負荷誘導的心臟重構明顯減輕，而通過在IRF8轉基因小鼠中持續激活NFATc1獲得IRF8/CaNFATc1雙轉基因小鼠（DTG），結果表明，NFATc1的持續激活消除了IRF8對心臟重構的抑制作用，DTG小鼠的心臟重構程度明顯較IRF8轉基因小鼠嚴重，說明IRF8對心臟重構的抑制作用主要是通過抑制NFATc1的活性介導的。本研究的體內和體外的實驗結果均表明，IRF8能顯著抑制壓力負荷誘導的心臟重構，且其對心臟重構的抑制作用主要依賴於NFATc1，干預IRF8可能成為一個潛在的臨床治療心臟重構的新靶點。
