《IL-27和EGF共調控CXCL5對肝癌微環境中抑制性免疫細胞的影響》是依託復旦大學，由徐曉晶擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：IL-27和EGF共調控CXCL5對肝癌微環境中抑制性免疫細胞的影響
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：徐曉晶
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
肝癌微環境中趨化因子CXCL5能夠促進腫瘤的生長和轉移，成為潛在的治療靶點。然而調控CXCL5的分子機制尚不十分明確。我們的前期工作證實，EGF能夠激活PI3K/Akt、ERK1/2、p38/MAPK信號通路，促進肝癌細胞分泌CXCL5。預實驗則提示IL-27能夠抑制肝癌細胞分泌CXCL5，具體機制尚待明確。此外，經研究證實，CXCL5能夠募集髓源性抑制細胞、調節性T細胞，介導腫瘤免疫逃逸。因此，我們認為IL-27和EGF共調控CXCL5可能會對肝癌微環境中抑制性免疫細胞產生影響。為驗證這一構想，我們通過小鼠肝癌細胞Hepa 1-6、小鼠肝癌模型，採用慢病毒載體、流式細胞術、細胞免疫螢光、Western Blot等技術，從分子、細胞和動物水平，探討IL-27和EGF共調控CXCL5的分子機制及其對抑制性免疫細胞的影響，旨在豐富微環境對肝癌生長轉移的作用與機理，進一步為肝癌治療提供新的思路。
結題摘要
研究背景：肝癌微環境中CXCL5能夠促進腫瘤的生長和轉移，成為潛在的治療靶點。然而對於調控CXCL5的分子機制尚不明確。我們前期研究證實，EGF能夠激活PI3K/Akt、ERK1/2、p38/MAPK信號通路，促進肝癌細胞分泌CXCL5。預實驗提示IL-27能夠抑制肝癌細胞分泌CXCL5，具體機制不明確。 研究內容：（1）研究IL-27 對肝癌細胞分泌 CXCL5 的影響及其機制：採用IL-27 蛋白干預不同的人或鼠肝癌細胞株，設時間梯度和濃度梯度，檢測CXCL5蛋白水平；IL-27干預肝癌細胞後，檢測信號通路中關鍵蛋白的磷酸化水平；採用siRNA阻斷信號通路，觀察IL-27對CXCL5分泌的影響。（2）CXCL5對抑制性免疫細胞的影響：建立CXCL5干擾的鼠肝癌細胞和C57BL/6小鼠肝癌動物模型，觀察細胞體外遷移侵襲能力和體內成瘤能力。（3）IL-27和EGF共調控CXCL5對肝癌生長的影響：建立小鼠肝癌模型，分別採用IL-27蛋白和/或EGFR抑制劑干預，觀察腫瘤生長情況，並用流式細胞術檢測調節性B細胞、調節性T細胞所占細胞比例，採用ELISA檢測相關免疫細胞因子的表達。 重要結果及數據：（1）IL-27抑制肝癌細胞分泌CXCL5且具有濃度和時間依賴性；IL-27干預後細胞內STAT1磷酸化水平升高最為明顯；通過siRNA方法阻斷該信號通路，發現IL-27抑制CXCL5分泌的作用被抵消。（2）建立CXCL5干擾穩轉鼠肝癌細胞，收集細胞上清液進行遷移和侵襲實驗，CXCL5干擾組較對照組遷移和侵襲細胞數明顯下降，差異有統計學意義（P＜0.001）；CXC5干擾後的小鼠腫瘤體積明顯減小，且腫瘤組織中的Foxp3+T細胞和F4/80細胞較對照組均下降。（3）採用Hepa1-6細胞株皮下注射C57BL/6小鼠，分別用EGFR抑制劑和（或）IL-27蛋白腹腔注射，結果示EGFR抑制劑和IL-27聯合干預組的腫瘤體積最小（p＜0.01）。ELISA結果提示聯合干預組小鼠外周血中相關免疫抑制性細胞因子IL-10、IL-35、TGF-β的表達均降低，流式細胞術結果提示聯合干預組調節性B細胞、調節性T細胞所占細胞比例最低。 科學意義：IL-27和EGF對CXCL5的共調控作用使得IL-27和EGFR抑制劑聯合治療在小鼠肝癌動物模型中顯示出一定的治療效果，為後續肝癌治療提供新思路。
