H7N9疫苗

H7N9型禽流感是一種新型禽流感，於2013年3月底在上海和安徽兩地率先發現，而在2017年1月再次發生H7N9型禽流感疫情。H7N9疫苗研製嘗試把H7N9的主要致病基因植入到成熟的疫苗載體上，更加有效的激發人體產生免疫應答。未來，H7N9禽流感疫苗將在活禽和養殖場工作人員、家庭主婦等高危人群中推廣接種。

基本介紹

• 中文名：H7N9疫苗
• 類型：疫苗
• 流感爆發時間：2013年4月
• 研製進程：完成抗體篩選，正式進入臨床試驗

一、 簡介

截至2017年，已有多個H7N9疫苗備選株通過了WHO安全性評價，可用於疫苗研發。在此基礎上， H7N9滅活疫苗、減毒活疫苗以及重組疫苗均已取得較好的研究結果。部分藥企也先後提交疫苗臨床試驗申請，H7N9疫苗的研製工作目前進度不一。

二、難題

H7N9禽流感病毒感染早期若使用常見抗病毒藥物進行干預，能有效降低併發症的發生率，減少感染者死亡。但已有研究顯示，新型H7N9禽流感病毒已對目前使用的如金剛烷胺、扎那米韋、奧司他韋、帕拉米韋等抗病毒藥物產生了抗性。有的 H7N9禽流感病毒甚至有對扎那米韋和奧司他韋的雙重抗性。這使得H7N9禽流感病毒感染的治療具有時限性，且變得困難。

對於外界關注度很高的H7N9流感疫苗的問題，國家衛計委表示，目前並沒有預防H7N9病毒感染的疫苗可用。

三、研究進展

1 疫苗備選毒株的選育 獲得疫苗備選株是疫苗研發的第一步。自2013年H7N9禽流感病毒感染人以來，已有很多研究機構按照WHO的要求進行H7N9禽流感病毒疫苗備選株的選育。世界多地雖已分離出多個H7N9禽流感毒株，但均與首次分離得到的A/Shanghai/2/2013 和 A/Anhui/1 / 2013株同源。因此，WHO推薦使用這兩個毒株作為母本株選育疫苗株。美國CDC的Callie Ridenour等採用反向遺傳重配技術重配A/Puerto Rico/8/34（H1N1）和 A /Shanghai/2/2013（H7N9）毒株，得到了IDCDCRG- 32A 和IDCDC-RG32A.3。日本國立傳染病研究所 （NationalInstituteofInfectiousDiseases， NIID）的 NAKAMURA等使用A/Puerto Rico/8/34（H1N1） 和A/Anhui/1/2013（H7N9）毒株，以6:2的形式進行反向遺傳重配， 得到了3個不同的病毒NIIDRG-10、 NIIDRG-10.1和NIIDRG-10.2,通過對病毒抗原性、免疫原性、雞胚高產性等一系列分析比較後，獲得疫苗備選株NIIDRG-10.1。另外的一些疫苗備選株是由美國FDA或英國NIBSC重配得到的。

CHIA等使用 H7N9疫苗株NIBRG-268在MDCK細胞上進行連續傳代，獲得可在MDCK細胞上高產的H7N9禽流感病毒疫苗株。WODAL等 使用Vero細胞對H7N9A/Anhui/1/2013virus進行培養，用於製備人用H7N9禽流感疫苗全病毒滅活疫苗。

2 動物實驗 目前已有H7N9全病毒滅活苗、 H7N9裂解疫 苗、 H7N9減毒活疫苗以及H7N9重組疫苗進行了動 物實驗。

2.1 H7N9滅活疫苗動物實驗 CHIA等及 WONG等的H7N9禽流感全病毒滅活疫苗的雪貂實驗結果顯示，在無佐劑的情況下，單純H7N9全病毒滅活疫苗只能激起雪貂機體內較低水平的體液免疫反應，當H7N9野毒株攻毒時，疫苗僅能保護雪貂免於死亡，不能使雪貂免於野毒株感染， 雪貂依舊會出現與對照組相似的臨床症狀。與此結果相似的是， WODAL等使用H7N9禽流感全病毒滅活苗免疫小鼠及豚鼠後發現，疫苗能引起實驗動物的體液免疫，產生抗HA和抗NA抗體，疫苗對免疫後小鼠和豚鼠的保護效果與接種劑量成正相關。此外，DUAN等用含佐劑的H7N9裂解疫苗 免疫小鼠，結果疫苗能對實驗動物產生良好的免疫保護，激起實驗動物體內體液免疫及細胞免疫，產生較平衡的Th1和Th2型免疫反應。 總體來看，在H7N9禽流感滅活苗（全病毒滅活苗和裂解疫苗）中加入佐劑是提高其免疫效果的有效手段，開發能夠滿足H7N9疫苗使用的佐劑對於疫苗研發具有重要意義，目前對佐劑MF59、 AS03的研究較多，且已進入臨床階段。

2.2 H7N9減毒活疫苗動物實驗 流感減毒活疫苗具有比滅活疫苗更好的免疫保護效果。減毒活疫苗能夠激起機體內體液免疫及黏膜免疫，同時還能激起較好的細胞免疫。季節性流感減毒活疫苗生產時，使用具有冷適應性的母本毒株與流行株進行重配，獲得季節性流感減毒活疫苗備選株。由此啟發， DEJONGE等的研究小組將A/Leningrad/134/ 17/57（H2N2）與H7N9A/17/Anhui/2013/61重配製成減毒活疫苗，並進行雪貂實驗，結果顯示，接種 1至2劑減毒活疫苗後，雪貂能產生較好的體液免疫 和細胞免疫，能夠抑制野毒株在其體內複製。YANG 等和KONG等的研究小組使用A/AnnArbor/ 6/60（H2N2）與A/Anhui/01/2013（H7N9）製得減毒活疫苗 ，雪貂實驗結果與DEJONGE等的研究結果一致。 由此看出，人用H7N9禽流感減毒活疫苗在動物模型上較滅活疫苗有效，不需佐劑即能有效激起 體液免疫、細胞免疫及黏膜免疫，保護免疫動物不受感染， 具有進一步進行臨床研究的價值。

2.3 H7N9重組疫苗動物實驗 為了更快地生產出大量抗原製成疫苗，防控相關疾病，重組疫苗的研 發成為熱點。美國FDA在2013年批准了三價季節性流感重組疫苗（FluBlock）上市。該疫苗被證明套用於成年人是安全的，且免疫效果較傳統疫苗好。 因此，研究人員也開始研發人用H7N9禽流感疫苗 重組疫苗，主要為全長HA重組疫苗（rHA）和 加 入了病毒M、NP等蛋白的VLPs疫苗。在H7N9rHA疫 苗研究初期發現， 與季節性流感重組疫苗相比，單純H7N9rHA疫苗對動物模型的保護效果較差。 CAO等使用腺病毒表達載體製備出H7N9（A/ Anhui/1/2013） rHA疫苗， 加入核酸佐劑後，能有效激起小鼠體內體液免疫和細胞免疫，對 H7N9野毒株產生抵抗力，較好地保護BALB/c小鼠。類似的結果在YANG等的研究中得到了證實。LIU等純化出具有較高血凝抑制滴度的H7N9VLPs（含M、 NP蛋白），以其免疫雪貂，使用同源毒株A/Anhui/ 1/2013（H7N9）感染雪貂時發現，免疫組雪貂與對照組相比，基本未出現H7N9感染的臨床症狀， 雪貂體內的病毒複製得到了抑制，肺部和氣管也未受到病毒感染。SMITH等的研究結果還顯示， 加入佐劑的重組H7N9VLPs免疫動物，還能對A（H7N3）產 生交叉保護。 重組疫苗在動物模型上的研發成功，預示了重 組疫苗用於人體免疫的可行性。

3.人用H7N9禽流感疫苗臨床研究進展 人用H7N9禽流感疫苗研發已成為目前研究的熱點。葛蘭素史克、諾華等疫苗公司以及美國過敏症病研究所（NationalInstituteofAllergyand InfectiousDiseases， NIAID）等機構已申請了人用H7N9 禽流感疫苗的臨床試驗。諾華公司率先完成了H7N9VLPs疫苗一期臨床劑量研究，同時也完成了H7N9VLPs疫苗佐劑Matrix-M1TM的臨床一期、 二期研究。葛蘭素史克公司則完成了其疫苗在18-64歲人群中免疫原性及安全性臨床一期試驗。

進入一期臨床試驗的受試者使用的H7N9禽流 感減毒活疫苗由俄羅斯RUDENKO等的研發小組研發， 在18-49歲人群中完成了臨床一期試驗。 在一期臨床試驗中，免疫組發生不良反應的機率與安慰劑組無差異，疫苗中的減毒活毒不會從疫苗接種人群傳至未接種人群，證明疫苗具有較高的安全 性。該減毒活疫苗第1劑免疫後血清抗體陽轉率可達48%，第 2 劑免疫後血清抗體陽轉率可達93%。大部分受試者在接受兩劑免疫後，其體內病毒特異的 CD4+細胞比例明顯增加， 預示受試者可能對H7N9野毒株具有抵抗力。

另一些進入臨床研究的是針對疫苗中添加的 佐劑成分。AS03 和MF59佐劑均能提高H7N9滅活疫苗的免疫保護率，引起機體相應的體液免疫和細胞免疫，但兩者進行比較發現， AS03的效果優於MF59， AS03能夠使 機體獲得更好的交叉免疫保護。新型免疫佐劑 Matrix-MTM 也被套用於H7N9疫苗的研究中。前期 Matrix-MTM H5N1疫苗臨床試驗證明，其能引起機體 產生同源或異源性抗體，同時能介導機體產生Th1 型細胞免疫反應。Matrix-MTM 是H7N9疫苗開發 過程中較有研究前景的佐劑。

四、最新報導

2017年2月15日晚間，天壇生物對外宣布其H7N9流感疫苗獲得臨床試驗批件。此外，華蘭生物的H7N9流感疫苗已經完成I期臨床試驗，進入II期臨床籌備階段；科興生物也已提交了H7N9疫苗的臨床試驗申請。

五、展望

截至目前，H7N9禽流感病毒感染人的病例仍以散發形式存在。H7N9禽流感病毒雖還不能人傳人，卻是一個潛在的大流行流感病毒人用H7N9禽流感疫苗的研發刻不容緩。目前已有H7N9禽流感 病毒滅活疫苗、 減毒活疫苗、重組疫苗完成了一期或二期臨床研究，但距離疫苗投產尚有一段距離。 新型重組疫苗在臨床試驗中表現出較好的免疫保護效果，但其生產過程中使用了腺病毒表達系統，長期多次使用可能對接種者造成不可預估的影響。 現階段研發的人用H7N9禽流感經典疫苗，除減毒活疫苗外，均需加入佐劑才能更好地激起機體的免疫反應。因此，開發能夠滿足H7N9疫苗研發需要的佐劑至關重要。目前已用於臨床試驗的佐劑有鋁佐劑、 ASO3、 MF59。新型佐劑Matrix-MTM正在申請臨床研究。Toll樣受體、核酸佐劑已套用於其 他研究領域，可嘗試套用於人用H7N9禽流感疫苗的研發。 此外，用於研發的人用H7N9禽流感疫苗株仍是雞胚依賴型。考慮到雞胚培養流感病毒的局限性，基於細胞培養的，尤其是基於WHO推薦的能用於疫苗生產的Vero細胞培養，且能在Vero細胞上進行連續傳代的H7N9禽流感病毒疫苗備選株的開發，在H7N9大流行流感疫苗的研發中具有重要意義。

參考文獻

【1】 中國生物製品學雜誌2017年2月第30卷第2期 Chin J Biologicals February2017，Vol.30 No.2《人用 H7N9 禽流感疫苗的研究進展》 郭琦 綜述 /廖國陽 審校

【2】 新京報(北京)《 多家藥企拿到H7N9疫苗臨床試驗批件》 新京報訊(記者李丹丹)