GITRL在小鼠膠原誘導性關節炎發生中的作用及其機制研究

《GITRL在小鼠膠原誘導性關節炎發生中的作用及其機制研究》是依託江蘇大學，由王勝軍擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：GITRL在小鼠膠原誘導性關節炎發生中的作用及其機制研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：王勝軍
• 依託單位：江蘇大學

項目摘要

類風濕關節炎（RA）是以多關節持續性炎症為特徵的慢性自身免疫性疾病，膠原誘導性關節炎（CIA）小鼠是研究RA的理想動物模型。現有研究證實Th17細胞在RA的發病中發揮關鍵性作用。GITRL是新近發現的腫瘤壞死因子超家族成員，具有解除Treg細胞免疫抑制功能和共刺激效應性T細胞活化增殖的作用。課題組前期研究發現GITRL具有加劇CIA發病的作用，並且CIA小鼠體內Th17細胞顯著增加，體內外實驗表明GITRL可促進Th17細胞產生，由此我們推測GITRL可能通過促進Th17細胞產生而加劇CIA的發生。因此本課題將進一步研究GITRL促進Th17細胞產生的可能途徑及其機制；觀察GITRL蛋白、以及GITRL蛋白誘導的Th17細胞在CIA發生髮展中的作用；研究抗GITRL抗體或GITR-Ig融合蛋白對CIA發生的影響。為進一步闡明RA的發病機制、尋找新的免疫干預手段提供實驗依據。

結題摘要

類風濕關節炎（RA）是臨床常見自身免疫性疾病，現有研究證實Th17細胞在RA的發病中發揮關鍵性作用。GITRL是新近發現的腫瘤壞死因子超家族成員（又稱為TNFSF18），具有解除Treg細胞免疫抑制功能和共刺激效應性T細胞活化增殖的作用。 本項目以膠原誘導性關節炎（CIA）小鼠和RA患者作為研究對象,探討GITRL在疾病中的作用及其機制，結果發現： （1）類風濕關節炎（RA）患者體內sGITRL明顯增加，並且sGITRL與IL-17及疾病活動性呈現正相關； CIA小鼠發病過程中GITRL表達增加，同時Th17細胞高表達GITR。（2）mGITRL可以加速小鼠CIA發病過程，小鼠體內Th17細胞的比例和數目明顯增加，血清中IL-17含量和關節局部IL-17mRNA水平明顯高於對照組。（3）GITRL可以明顯增加體外培養體系中Th17細胞的百分比和細胞數目，上調Th17細胞特異性轉錄因子RORγt的表達；並且Th17細胞的比例和細胞培養上清中IL-17濃度與GITRL濃度呈現一定的劑量依賴性。結果提示在體外GITRL蛋白可以促進Th17細胞的產生。（4）mGITRL蛋白可明顯上調健康小鼠脾臟中Th17細胞比例和數目；並且GITRL處理組小鼠脾臟CD4+ T細胞分泌IL-17的濃度高於對照組，表明GITRL在正常小鼠體內可以促進Th17細胞的增加。（5）GITRL促進Th17細胞胞內p38的磷酸化水平，p38抑制劑能明顯下調Th17細胞比例，降低RORγt和IL-17的表達，並且這種效應呈現劑量依賴性。與此同時，GITRL可促進STAT3ser727位點的磷酸化，而p38的抑制劑能明顯下調STAT3ser727位點的磷酸化水平。結果提示GITRL可通過p38MAPK- STAT3途徑調控Th17細胞分化。（6）表達純化GITR-Fc融合蛋白並進行鑑定。對CIA小鼠給予GITR-Fc融合蛋白處理後，能夠明顯減輕小鼠關節的臨床評分，降低關節炎的發病率，病理學檢查發現關節炎症明顯減輕，體內自身抗體和抗體分泌細胞也顯著下降。結果顯示GITR-Fc融合蛋白可降低小鼠關節炎的發病。 上述結果表明，GITRL可通過p38MAPK- STAT3途徑促進Th17細胞分化，從而加劇小鼠CIA的發病，套用GITR-Fc融合蛋白阻斷GITRL/GITR途徑可降低小鼠關節炎的發生。