《GITRL調控Tfh細胞促進小鼠膠原誘導性關節炎發病的實驗研究》是依託江蘇大學，由馬潔擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：GITRL調控Tfh細胞促進小鼠膠原誘導性關節炎發病的實驗研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：馬潔
- 依託單位：江蘇大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
研究表明GITR/GITRL可促進小鼠膠原誘導性關節炎（CIA）發生，但其作用機制尚不完全清楚。濾泡輔助性T細胞（Tfh）是新近發現的CD4+ T細胞亞群，對體液免疫具有重要的調控作用，Tfh細胞功能異常可促進自身免疫性疾病的發生。我們的研究發現Tfh細胞表面高表達GITR，體外GITRL可增加Tfh細胞比例，體內GITRL可增加CIA小鼠Tfh細胞數量和功能。由此，我們推測：GITRL可直接作用於Tfh細胞，促進其活化增殖，促使B細胞分泌大量自身抗體而加重CIA發病。本課題首先研究體外GITRL促進Tfh細胞活化增殖作用及其分子機制；第二，進一步明確GITRL對CIA的作用，了解Tfh細胞變化情況；第三，觀察GITR融合蛋白阻斷GITR/GITRL途徑後，對CIA發病及Tfh細胞變化的影響。通過上述研究，將為闡明GITRL的免疫調控機制，以及尋找類風濕性關節炎治療靶點提供理論和實驗依據。
結題摘要
本課題在分離純化的小鼠脾臟CD4+ T細胞培養體系中加入糖皮質激素誘導的腫瘤壞死因子受體的配體（GITRL）蛋白，觀察該蛋白對濾泡輔助性T細胞（Tfh）的作用；利用膠原誘導的類風濕性關節炎（CIA）小鼠模型，體內注射GITR-Fc蛋白阻斷GITR/GITRL 信號通路，觀察其對CIA小鼠發病的影響、研究CIA小鼠體內Tfh細胞、CD19+ B細胞、CD138+漿細胞數量的變化、抗Ⅱ型膠原特異性抗體、脾臟及骨髓中抗體分泌細胞數量的變化。實驗結果表明GITRL 可直接作用於Tfh 細胞，促進其活化增殖，抑制其凋亡，促使B 細胞分泌大量自身抗體而加重CIA 發病，GITR-Fc蛋白阻斷GITR/GITRL 信號通路後能顯著緩解CIA小鼠的疾病嚴重程度，在降低Tfh細胞增殖的同時抑制抗體分泌細胞的數量及自身抗體的表達水平，可作為CIA的免疫干預靶點。 收集類風濕性關節炎（RA）患者外周血，與正常對照組相比，RA患者體內可溶性GITRL（sGITRL）的表達水平和Tfh細胞的比例明顯增加，相關性分析結果顯示，RA患者外周血中Tfh細胞比例與抗環瓜氨酸抗體（Anti-CCP）水平呈正相關關係。與此同時RA患者外周血中Bcl-6 mRNA、IL-21mRNA和血清中IL-21的表達水平也均顯著增加。為了研究GITRL在RA中促進Tfh 細胞活化增殖作用的分子機制，本課題通過生物信息學預測尋找調控Tfh細胞特異性轉錄因子Bcl-6的miRNA（miR-346），通過螢光素酶報告實驗證實miR-346靶向作用於Bcl-6；明確miR-346與Bcl-6 3’-UTR的兩個結合位點的作用強度。體外實驗證實，人外周CD4+ T細胞過表達miR-346後會引起培養體系中CD4+CXCR5+ T細胞的比例明顯下調，提示miR-346可能在RA的發生髮展過程中起到了負向調控的作用。本研究進一步以表達Bcl-6的Jurkat細胞做為模型，使Jurkat細胞過表達miR-346，結果顯示，miR-346在mRNA和蛋白水平上均抑制了Bcl-6的表達，表明miR-346可通過調控Tfh細胞在RA發生髮展過程中發揮作用，進一步明確了RA的發病機制。
