DTNB

DTNB是5,5'-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)(5,5'-Dithiobis-(2-nitrobenzoic acid)) 的簡稱。一方面它和碳酸氫鈉以一定的比例而混合後用作產物乙醯膽鹼的顯色劑，顯黃色，通常用於農殘檢測，它吸光度來反映酶的抑制率值，最終用來初步判斷農藥是否超標。另一方面常用於檢測游離的巰基（-SH），此時也稱作Ellman試劑。

基本介紹

• 中文名：DTNB
• 分子量：396.3500
• 熔點：240～245℃
• 套用：測定蛋白質、多肽和組織中巰基的靈敏試劑

基本物化信息

分子式：C14H8N2O8S2； [-SC6H3(NO2)CO2H]2

性狀：類白色或黃色粉末。微溶於乙酸和水。（分解）。有刺激性。

貯存：陰涼乾燥處保存;儲存溫度2-8°C

用途：有機磷農藥中毒的監測（膽鹼酯酶測定）。 0.5mM-5mM可以滅活細胞表面的離子通道，2mM-5mM可以使細胞表面的二硫鍵異構酶（PDI）失活，DTNB本身不能通過細胞膜。

製備

在Ellman的原始論文中，他通過氧化2-硝基-5-氯苯甲醛成羧酸，經與硫化鈉反應引入巰基基團，進一步利用碘氧化兩個單體耦合。今天這種試劑可以在市場上買到。

Ellman測試

含巰基化合物可以與DTNB反應，斷裂DTNB的二硫鍵產生2-硝基-5-硫代苯甲酸（NTB-），若在中性或鹼性pH條件下的水中可以離子化，生成NTB2-二價陰離子。這種NTB2-離子呈現黃色。

DTNB與一種巰基化合物（R-SH）的反應

這個反應迅速且定量，加入1摩爾的巰基可以釋放1摩爾的NTB。通過測定在412nm可見光吸光度就可以定量NTB2-，在稀釋的緩衝溶液中消光係數為14150M-1,在高鹽濃度的溶液中（比如6M的鹽酸胍或者8M的尿素）消光係數為13700M-1。最近發表的論文指出，1959年原始論文所確定的稀溶液中的消光係數被低估了，為13600M-1。

Ellman試劑可以用於測定低分子量的巰基化合物，比如在純溶液和生物樣品（如血液）中測定谷胱甘肽（GSH）。它也可以測定蛋白質上巰基的基團的數目。