《Bcl-2靶向小分子抑制劑抗淋巴瘤耐藥性及臨床套用》是依託中山大學，由孫健擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：Bcl-2靶向小分子抑制劑抗淋巴瘤耐藥性及臨床套用
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：孫健
- 依託單位：中山大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
細胞凋亡是抗癌藥物的最新藥物發現靶點，其研發集中在如何特異誘導癌細胞凋亡而達到治療目的。bcl-2是最初在B細胞淋巴瘤發現的一種原癌基因，Bcl-2是重要的細胞凋亡調控因子。正常細胞其表達水平很低，癌細胞中則過高表達。研究表明Bcl-2過度表達引起腫瘤對化療藥物的耐受，尋求靶向Bcl-2的治療成為新的抗腫瘤治療策略。套用有效基於蛋白結構的框架設計出一系列特異的Bcl-2小分子抑制劑。其中最有效的BM-792與Bcl-2結合的 Ki值＜ 1 nM ，能有效誘導腫瘤細胞凋亡。本研究擬開展系列聯合BM-792用藥，以拮抗淋巴瘤細胞耐藥性，明確BM-792抗淋巴瘤細胞作用通路及機制。通過檢測患者淋巴瘤組織及外周血的循環中腫瘤細胞（CTCs）的bcl-2擴增等生物標誌物，為BM-792在臨床研究中患者選擇及療效預測打下基礎。項目預期可為BM-792開發成為靶向Bcl-2的新型抗淋巴瘤藥物提供依據。
結題摘要
Bcl-2家族蛋白是細胞凋亡內源性途徑的核心因子，抗凋亡蛋白及促凋亡蛋白通過BH結構域形成同源或異源二聚體控制凋亡的啟動。Bcl-2家族蛋白在多種腫瘤中過高表達，與腫瘤的發生髮展相關，能夠抑制細胞凋亡引起細胞對化療藥物的耐藥。Bcl-2靶向小分子抑制劑已成為新的腫瘤靶向治療策略。既往研發的Bcl-2抑制劑，由於親和力過低、特異性不足、廣譜性不夠等原因一直未能在臨床使用。國內首次研發的Bcl-2抑制劑BM-1197是BH3結構域高度類似物，具有結構新穎、親和力高、特異性強等特點，其親和力優於ABT-737/263。 本研究採用CCK-8法來測定BM-1197單藥及聯合化療藥物對OCI-ly8細胞的增殖抑制和毒性；Bcl-2家族蛋白表達測定用Western blotting方法；細胞周期及亞凋亡峰用PI單染法進行檢測；細胞凋亡形態學改變用Hoechst 染色法檢測；細胞凋亡率用AnnexinⅤ/PI雙染法進行檢測；細胞色素c的釋放則需要分別提取胞漿和線粒體蛋白後再用Western blotting方法檢測；用免疫共沉澱的方法檢測蛋白間的相互作用；並且與化療藥物具有協同作用；結果顯示BM-1197通過內源性途徑誘導細胞凋亡，可能是BM-1197模擬BH3結構域與Bcl-2/Bcl-xl結合從而釋放Bax，或者上調促凋亡蛋白PUMA 的表達、促進Bim與Bcl-2/Bcl-xl結合，釋放Bax並引起Bax構象改變，導致細胞色素c的釋放，激活啟動分子caspase-9，進而激活效應分子caspase-3，-7，從而導致細胞凋亡的發生。Mcl-1的高表達影響BM-1197的抗腫瘤活性，提示Mcl-1可能是BM-1197療效預測的指標之一。同時檢測了15例淋巴瘤患者的組織及外周血循環腫瘤細胞（CTCs）的bcl-2基因拷貝數與BM-1197的敏感性之間的關係。 本課題的研究內容已按研究工作計畫完成，包括：BM-1197可提高淋巴瘤細胞對常規化療藥物的敏感性，拮抗耐藥性；並通過線粒體凋亡通路誘導淋巴瘤細胞凋亡；患者的循環中腫瘤細胞（CTCs）的bcl-2，可作為療效預測的生物標誌物，預測BM-1197臨床研究中指導病人的選擇。其中本課題資助已發表SCI收錄論文3篇，餘2篇SCI論文撰寫待發表，通過本課題的研究，今後發展成為新型的小分子抗腫瘤藥物提供理論基礎。
