BB(考馬斯亮藍)

考馬斯亮藍（coomassie brilliant blue）一定範圍內與蛋白質濃度成正比，因此可用於蛋白質的定量測定。

基本介紹

• 中文名：考馬斯亮藍
• 英文名：coomassie brilliant blue
• 別稱：BB
• 套用：蛋白質的定量測定

適用範圍

該方法用於大多數蛋白質的定量是比較精確的，但不適用於小分子鹼性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污劑的濃度超過0．2%影響測定結果，如TritonX-100、SDS、NP-40等。常用於細胞骨架的檢驗。

操作步驟

濃染液

將100mg考馬斯亮藍G-250溶於50mL 95%乙醇，加入100mL 85%的磷酸，然後，用蒸餾水補充至1000mL，此染液放4℃至少6個月保持穩定。

樣本準備

儘量使用與待測樣本性質相近的蛋白質作為標準品，例如測定抗體，可用純化的抗體作為標準。如果待測樣本是未知的，也可用抗體作為標準蛋白。通常在20μg—150μg/100μL之間繪製標準曲線。

溶解

將待測樣本溶於100~1緩衝溶液中，該緩衝溶液應與製作標準曲線的緩衝溶液相同(最好用PBS)。

稀釋

按1：5用蒸餾水稀釋濃染料結合溶液，如出現沉澱，過濾除去。

作用

每個樣本加5mL

稀釋的染料結合溶液，作用5～30min。染液與蛋白質結合後，將由紅色變為藍色，在595nm波長下測定其吸光度。注意，顯色反應不得超過30min．

計算

根據標準曲線計算待測樣本的濃度。