《髙脂肥胖小鼠肝臟核受體的變化及調控作用研究》是依託中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院，由劉瓊明擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：髙脂肥胖小鼠肝臟核受體的變化及調控作用研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：劉瓊明
- 依託單位：中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
肥胖已成為嚴重威脅人類健康的代謝和營養失衡性疾病。腹部脂肪組織通過分泌自由脂肪酸、激素、炎性因子等參與非酒精性脂肪肝病（NAFLD）、肝硬化、肝癌等的發生髮展過程。核受體是調節肝臟特異基因表達的重要轉錄因子超家族，參與肝臟生理病理過程，與肝炎、肝纖維化、脂肪肝等多種肝病的發生髮展密切相關。但核受體超家族蛋白在肥胖症肝臟中的動態變化及其對肝臟病理生理的影響尚無報導，本課題擬採用NRRE-pulldown親合富集聯合質譜鑑定內源核受體蛋白的技術，通過引入質譜定量策略，檢測核受體超家族蛋白在髙脂肥胖小鼠肝臟中的表達變化，建立差異核受體蛋白質組與肥胖症肝臟代謝活動的聯繫；對差異顯著的核受體/輔調節蛋白進行深入功能研究，用生物學分析手段探討其在肥胖症肝臟代謝中的調控作用。結果有望為系統了解核受體超家族蛋白在肥胖症肝臟中的調控作用提供理論依據，為肥胖相關代謝綜合症的治療提供新靶標。
結題摘要
核受體是調節肝臟特異基因表達的重要轉錄因子，在肝臟生理病理過程及肝炎、肝纖維化、脂肪肝等多種肝病的發生髮展中發揮重要作用。為了研究核受體超家族蛋白在肥胖症肝臟中的動態變化及其對肝臟病理生理的影響，本課題採用NRRE-pulldown親合富集、質譜鑑定和無標定量的方法研究內源核受體蛋白在髙脂肥胖小鼠肝臟中的表達變化，發現了並確證了一批在肥胖小鼠肝臟中高表達的轉錄因子及其輔調節蛋白。通過生物信息學分析，我們選擇了多個候選蛋白進行後續的功能分析，主要通過腺病毒介導的shRNA敲低策略在肥胖小鼠肝臟中特異行敲低候選蛋白，通過表型分析進行功能解讀。最終我們發現敲低在DIO鼠肝臟中表達顯著上調的轉錄因子Pu.1/sfpi1能改善DIO鼠糖尿病表型。 進一步的研究證實肝臟特異性敲低Pu.1能顯著降低db/db糖尿病小鼠空腹血糖並改善其糖耐受能力，對代謝通路的分析顯示Pu.1的敲低能顯著降低肝臟糖異生活性。另外，由於轉錄因子Pu.1是巨噬細胞決定性轉錄因子，我們對肝組織進行HE和F4/80免疫組化分析發現Pu.1敲低引起肝臟巨噬細胞顯著聚集，進一步的Ki-67染色顯示Pu.1敲低能引起巨噬細胞增殖。通過流式細胞術（FACS）發現肝臟巨噬細胞亞群發生顯著變化，Pu.1敲低引起募集巨噬細胞（RM）增多。對肝臟組織炎性水平的分析，發現致炎細胞因子IL-6和TNFa顯著下調，而具抗炎活性的IL-10則顯著上調，表明肝組織炎性水平下降。通過對M1、M2型巨噬細胞分子標誌的分析，發現Pu.1敲低引起肝臟巨噬細胞發生M2型活化。 本項目首先採用生物質譜為基礎的蛋白質組學平台，對高脂飲食所致肥胖小鼠肝臟的轉錄因子及其輻調節蛋白進行了差異表達分析，試圖從組學的角度探討肥胖所致肝臟代謝網路的分子基礎。通過分子生物學等功能分析，我們發現轉錄因子Pu.1在肥胖／糖尿病小鼠的糖代謝和炎症調控中發揮重要作用。
