體內藥物分析是由藥物分析學派生出來的一門學科。它是通過分析人或動物體液及各組織器官中藥物及其代謝物濃度，了解藥物在體內數量和質量的變化，獲得藥物代謝動力學的各種參數和轉變，以及代謝的方式、途徑等信息，從而有助於藥物的研究、臨床合理套用等。
基本介紹
- 中文名：體內藥物分析
- 基本概念：藥物濃度直接與藥效相關
- 學科特點：樣品成分複雜，被測組分含量低
- 學科關聯：體內藥物分析學科發展
學科介紹,基本概念,學科特點,學科關聯,分析方法,光譜分析法,色譜分析法,免疫分析法,同位素標記,微生物測定,樣品種類,採集時間,血樣,尿液,唾液,樣品處理,處理目的,常用方法,樣品測定,常用方法,定量分析,學科套用,
學科介紹
基本概念
體內藥物濃度，尤其是血漿（或血清）藥物濃度直接與藥效相關，並受多種因素影響。例如，不同給藥途徑（如口服、吸人、靜脈注射、肌肉注射、透皮等）可直接影響藥物的吸收、分布、代謝和排泄，從而影響體內藥物的濃度以及經時行為，並最終影響療效。患者的生理因素（性別、年齡等），病理狀態（疾病的類型和程度），基因類型，吸收、代謝及分泌排泄功能，都影響藥物在體內的經時行為。許多藥物需經肝臟代謝或經腎臟排泄，所以對於肝或腎病患者，由於他們的肝臟生物轉化及代謝功能降低、或腎臟的分泌排泄功能降低，往往會造成藥物在體內蓄積，進而發生藥物毒性反應。
隨著現代醫學的不斷進步，人們對醫療質量也提出了更高的要求。治療藥物監測（Therapeutic Drug Monitoring，TDM）就是以靈敏可靠的方法，檢測病人在給藥後的血液或其他體液中的藥物濃度，並套用藥物代謝動力學理論，指導最適個體化用藥方案的制定和調整，以避免用藥劑量過大及可能產生的毒性反應，保證藥物治療的有效性和安全性。
學科特點
體內藥物分析的特點是樣品成分複雜，被測組分含量低。
學科關聯
體內藥物分析學科發展的最大推動力來自於生物醫學及新藥藥物動力學研究領域巨大的要求和分析技術上的飛躍性進步。與藥代動力學、臨床藥理學和生物藥劑學等學科互相關聯、密不可分。
分析方法
光譜分析法
包括比色法(colorimetry)、紫外分光光度法（UV ）和螢光分析法（Fluor ）。光譜法雖然儀器簡單、測定快速，但選擇性和靈敏度都較低，本法不具備分離功能，受結構相近的其他藥物、代謝產物和內源性雜質的干擾，因此用光譜法分析體液樣品時，除少數樣品外，一般都需經過組分分離、純化等預處理過程。光譜法的靈敏度低，不適用於測定藥物濃度低的生物樣品。
色譜分析法
色譜法具有對組分進行分離和分析的雙重作用，能排除與藥物結構相近的代謝產物和某些內源性雜質的干擾，具有很高的選擇性和較高的檢測靈敏度，常作為評價其他方法的參比方法。在某些情況下色譜法套用也受到一定限制，如HPLC 大多數儀器配備的是紫外和螢光檢測器，只限於測定具紫外吸收或產生螢光的組分，雖然對某些組分可通過衍生化方法使之具備紫外吸收或螢光性質，這勢必增加測定時的操作步驟。又如用GC 法測定生物樣品時，還受被測組分的揮發性和熱穩定性的限制。此外，對於測定濃度很低的樣品（如地高辛有效血藥濃度僅0 . 9 一2 . 2 拌g / L ）時，色譜法的靈敏度難以達到要求。
免疫分析法
包括放射免疫分析法（RIA ）、酶免疫分析法（EIA ）和螢光免疫分析法（EIA ）。
免疫分析是利用半抗原藥物與標記藥物競爭抗體結合原理的一種分析方法，具有快速、簡便和靈敏度高的特點，尤其適用於分析低藥物濃度的體液樣品及大量又需長期分析（如常規監測）的樣品。該法可直接測定體液樣品，並且耗費樣品量少。免疫分析法建立時，需針對每一種藥物製備特異性的抗體和標記藥物，費時、費力，在一般實驗室中難於辦到。目前通常採用試劑盒（又稱藥盒），但測定的藥物品種受試劑盒供應的限制。
同位素標記
藥物它們主要套用於放射免疫分析法（RIA） 、同位素逆稀釋分析，或作為GC - MS 分析中的內標，以及在藥物分離中作示蹤套用等。
微生物測定
利用抗生素在瓊脂培養基內的擴散作用，比較樣品與藥物標準品兩者對接種的試驗菌產生的抑菌圈的大小，藉以測定樣品內抗生素的濃度。
樣品種類
體內樣品包括各種體液和組織。但是，在體內藥物分析中最為常用的樣本是血液，它能夠較為準確地反映藥物在體內的狀況。尿液中常含有豐富的藥物代謝物，也被較多地使用。唾液因採集便利，且有時與血漿游離藥物濃度具有相關性而時有使用。而臟器組織，除非特別需要，在臨床治療藥物監測中很少使用。
採集時間
體內樣品的採集時間對測定結果的臨床價值影響很大，是開展臨床治療藥物監測必須考慮的基本問題。採集時間應在藥代動力學理論的指導下，根據臨床治療藥物監測的不同目的確定。
用藥方案的確定和調整是開展臨床治療藥物監測的主要工作。應該在用藥達到穩態後再採樣，以保證穩態血藥濃度是否維持在治療濃度範圍內，以鞏固療效或控制症狀的發作。
對於用藥已達療效、但需了解長期用藥是否會致慢性毒性時，也需要進行臨床治療藥物監測。取樣宜在達穩態後的血藥峰濃度時間點進行，以確定穩態峰濃度是否接近或超過中毒濃度，以便做出相應處理。
急性藥物中毒診斷時，應立即取樣測定。治療效果監測則可根據臨床需要確定取樣時間，監測劇藥效果。
臨床藥代動力學及藥效學研究時，大都採集給藥前及給藥後，藥物及其代謝產物在體內的吸收、分布、代謝和消除排泄各階段多個時間點的樣本，以便獲得完整的經時行為，為臨床用藥提供參考。
血樣
血樣包括全血（whole blood）、血漿（plasma）和血清（serum），它們是最為常用的體內樣品。血藥濃度監測，除特別說明是全血外，通常都是指血漿或血清中藥物濃度的測定。當藥物在體內達到穩定狀態時，血漿中藥物的濃度能夠反映藥物在靶器官的狀況，因而，血漿藥物濃度可作為體內藥物濃度的可靠指標。
血液樣品
血液樣品1.血樣（全血）的採集
動物實驗時，可直接從動脈或心臟取血。對於患者或志願者，通常採集靜脈血，有時根據血藥濃度和分析方法的靈敏度，也可用毛細管採血。血樣的採集時間由測定目的和藥代動力學參數決定。全血採集後置含有抗凝劑（例如：肝素、EDTA、草酸鹽、枸櫞酸鹽等，防止凝血後影響測定）的試管中，混合均勻，即得。血漿或血清由採集的全血製備。
2.血漿的製備
將採集的全血置含有抗凝劑的試管中，混勻後，以約1000×g力離心5～10分鐘，促進血紅細胞沉降分離，分取上清液即為血漿。
3.血清的製備
將採集的全血在室溫下放置至少0.5～1小時，待血液凝固後，再以約600×g力離心5～10分鐘，促進血細胞沉降分離，分取上清液即為血清。
因為藥物與血漿纖維蛋白幾乎不結合，所以，血漿與血清中藥物的濃度通常相同。血漿比血清分離快、製取量多（約為全血的50%），因而較血清更為常用。如果抗凝劑對藥物可能發生作用，並對藥物濃度測定產生干擾，則以血清為檢測標本。
血樣採集後應及時分離血漿或血清，並最好立即進行分析。如不能立即進行測定，應根據藥物在血樣中的穩定性及時處置，置於具塞硬質玻璃試管或聚塑管（Eppendorf）中密塞保存。短期保存時可置冰櫃冷藏（4℃），長期保存時需在-20℃或-80℃下冷凍貯藏，以保障樣本不變質和藥物穩定，保障監測濃度的準確。因冰凍有時可引起細胞溶解，妨礙血漿或血清的分離；或因溶血影響藥物濃度變化；所以全血未經分離時，不宜直接冷凍保存。
如果待測藥物在樣本中易受酶或酸鹼等的作用發生進一步變化，則須根據其自身性質選擇合適的方法進一步處置。通常的處置方法包括低溫冷凍、調節酸鹼度、加酶抑制劑等。
尿液
尿液包括隨時尿、晨尿、白天尿、夜間尿及時間尿幾種。健康成人一日排尿量為1～5L，尿液的pH值在4.8～8.0之間。尿液的主要成分是水、含氮化合物（其中大部分是尿素）及鹽類。
尿液樣品
尿液樣品體內藥物清除主要是通過腎臟排泄，經尿液排出。採集的尿液應該是自然排尿。尿液在放置時可因細菌繁殖而變混濁，因此，尿液採集後應立即測定。若不能立即測定（如需收集24小時的尿液），必須採集後立即處置、或低溫保存、或加入防腐劑後冷藏保存。常用的防腐劑有二甲苯、三氯甲烷、醋酸或鹽酸等。二甲苯等有機溶劑可以在尿液的表面形成薄膜，醋酸等可以改變尿液的酸鹼性，以抑制細菌的繁殖。保存時間在36小時以內，可置冰櫃冷藏；若需長時間保存，則應冰凍貯藏。
藥物可以原型（母體藥物）或代謝物及其綴合物（conjugates）等形式排出。尿液中藥物濃度大都較高，採集方便、且採集量大，但尿液濃度通常變化較大。所以，尿液藥物濃度測定的目的通常與血液或唾液樣品的不同，主要用於藥物尿液累積排泄量、尿清除率或生物利用度的研究，以及藥物代謝物及其代謝途徑、類型和速率等的研究。在臨床上，亦可推斷患者是否違反醫囑用藥。
尿液中藥物濃度的改變不能直接反映血藥濃度，即與血藥濃度相關性差。受試者的腎功能正常與否直接影響其對藥物的排泄能力，因而，尿液樣品的採集和測定應當與腎功能指標進行關聯分析。嬰兒的排尿時間難於掌握，且尿液不易採集完全。
測定尿液中藥物濃度時應採用時間尿（一定時間區間的尿液）。測定尿液中藥物的總量時，應收集用藥後一定時間內（如24小時，或至基本完全排泄的其他時間）各時間段排泄的全部尿液，記錄體積後，量取一部分用於藥物濃度的測定，再乘以尿液量，計算即可求得尿藥排泄總量。
唾液
唾液是由腮腺、頜下腺、舌下腺和口腔黏膜腺體分泌的黏液在V1腔里混合而成的消化液。一般成人每天分泌約1～1.5L.口腔黏膜受到機械或化學刺激時，各唾液腺的分泌會受到影響，造成唾液組成發生較大的變化；感官刺激所產生的條件反射以及思維、情緒也會影響唾液腺的分泌；隨年齡不同，唾液的分泌量也不同：小兒的唾液分泌量多，老年人的分泌量減少。通常得到的唾液含有黏蛋白，其黏度是水的1.9倍。唾液的pH值受分泌量變化的影響，分泌量增加時趨向鹼性而接近血液的pH值，其波動範圍為6.2～7.6.
唾液的採集應儘可能在安靜狀態下進行。一般在漱口後15分鐘收集，1分鐘內大約可採集1ml.唾液採集後應立即測量其除去泡沫部分的體積，並以1000×g力離心10分鐘，分取上清液作為藥物濃度測定的樣品。
若分泌量少，可轉動舌尖促進唾液的分泌；也可採用物理的（如嚼石蠟塊）或化學的（如維生素C、酒石酸）等方法刺激，使在短時間內獲得大量的唾液。但經刺激後唾液中的藥物濃度往往會受到影響。特殊需要時，可採集腮腺、頜下腺及舌下腺分泌的單一唾液。這種單一唾液的採集必須採用特殊唾液採集器收集。
唾液採集後，應在4℃以下保存。若分析時無影響，則可用鹼處理唾液，以使黏蛋白溶解而降低其黏度。冷凍保存的唾液在解凍後應充分攪勻後再使用，以避免因濃度不均勻而產生測定誤差。
樣品處理
處理目的
治療藥物監測中，除少數方法可以對採集的樣品直接進行分析外，大多需要對樣品進行必要的預處理。預處理的目的是在不破壞待測定成分的前提下，用適當的方法分離純化或濃縮待測藥物，以減少干擾、提高檢測靈敏度和特異性、降低對儀器的污染和損害。所以，體內樣品的預處理是體內樣品分析的重要環節。
常用方法
體內樣品的預處理方法的選擇需要綜合考慮多種因素，包括體內樣品的種類、被測藥物的性質和濃度、以及所採用的測定方法等三方面。
如血漿或血清需除蛋白，使藥物從蛋白結合物中釋出；尿液樣品則常採用酸或酶水解使藥物從綴合物中釋出；唾液樣品主要採用離心去除黏蛋白沉澱。
被測定藥物的結構、性質、存在形式與濃度範圍等，均直接影響到樣品前處理方法的選擇與套用。例如，藥物的酸鹼性（pKa）與溶解性影響到藥物的萃取分離條件的選擇，藥物的極性、穩定性、官能團性質和光譜特性影響到其色譜測定條件的最佳化選擇。不同藥物在樣品中的濃度相差懸殊，濃度大的樣品對前處理要求稍低，濃度越低則樣品前處理要求越高。
體內樣品前處理的方法以及分離純化的程度，均取決於測定要求和所採用的測定方法。測定方法的耐受污染程度和抗干擾能力越強、專屬性越好、靈敏度越高，則對前處理的要求越低。通常，免疫測定法由於具有較高的靈敏度和抗干擾能力，體內樣品只需經離心分離即可直接用於測定。而高效液相色譜和色譜-質譜聯用等方法，為防止蛋白質等在色譜柱上沉積、內源性干擾、或基質效應影響，色譜分析前均需對體內樣品進行去除蛋白、溶劑萃取、甚至製備衍生物等前處理。
1.去除蛋白質法
在測定血樣及組織勻漿等樣品中的藥物時，首先應去除蛋白質。去除蛋白質既可使蛋白結合型的藥物釋放出來以便測定藥物的總濃度，又可避免進一步的溶劑萃取過程中乳化的形成，並可消除內源性干擾，同時保護儀器性能（如保護HPLC柱不被蛋白污染），延長使用壽命。去除蛋白質常用的方法包括蛋白沉澱法和蛋白分解法。
2.綴合物水解法
藥物在體內經二相代謝可以形成葡糖醛酸苷或硫酸酯綴合物，並經尿液或膽汁排泄。為了準確測定體內樣品中藥物的含量，首先需將綴合物水解釋放出綴合的藥物或其代謝物後，再進行進一步的處理測定。常用的綴合物水解方法包括酸水解和酶水解。
酸水解通常使用無機酸，如鹽酸或磷酸溶液等。酸的濃度、水解時間和溫度等條件，應根據具體藥物進行最佳化確定。酸水解的優點是簡便、快速，但是專屬性較差，並需注意避免藥物的進-步降解。對於遇酸及受熱不穩定的藥物，可採用酶水解法。
酶水解法常用葡糖醛酸苷酶或硫酸酯酶，或二者的混合物。酶解時應當注意控制反應的pH、酶試劑用量、孵育溫度、酶解時間，並在厭氧條件下進行。尿液樣本進行酶解時，需要首先隱蔽會抑制酶活力的陽離子。
雖然酶水解法存在水解時間長、酶試劑帶人的黏液蛋白可能導致乳化及色譜柱污染等缺點，但酶水解法具有較高的選擇性，很少使被測藥物或共存物發生降解，所以常被優先選用。
3.分離純化與濃集法
對於濃度較高的樣品，或檢測方法具有足夠靈敏度時，體內樣品在經去除蛋白質或綴合物水解等前處理步驟後即可直接用於測定。但當藥物濃度較低或分析方法的特異性或靈敏度不夠高時，體內樣品需進行分離、純化與濃集處理，或在去除蛋白質或綴合物水解的基礎上進一步進行處理。
萃取法是套用最多的分離、純化方法。萃取的目的是為了從大量共存的內源性物質中分離出所需要的微量組分一藥物及其代謝物，並通過溶劑的蒸發使樣品得到濃集，殘留物採用適宜的溶劑復溶後再進行分析測定。萃取法包括液-液萃取法和液-固萃取法。
4.化學衍生化法
治療藥物監測的體內樣品色譜分析時，可根據待測物的化學結構和檢測方法的要求，通過化學衍生化方法，特異性地引入功能基團後再進行分析。通常對藥物分子中含有活潑H的極性基團，如含-COOH、-0H、-NH2、-NH-和-SH等，進行化學衍生化。化學衍生化的目的包括：改變待測藥物的色譜行為；增強藥物的穩定性；改善（手性拆分）分離能力；提高檢測靈敏度等。
GC分析中常對待測物進行矽烷化（silylation）、醯化（acylation）、烷基化（alkylation）或酯化（esterification）等。矽烷化套用最廣泛。矽烷化試劑有：三甲基氯矽烷（TMCS）、雙-三甲基矽烷乙醯胺（BSA）、雙-三甲基矽烷三氟乙醯胺（BSTFA）、三甲基矽烷咪唑（TMTS）等。醯化試劑有：乙酸酐、丙酸酐、五氟苯甲酸酐等。烷基化及酯化試劑有：五氟碘乙烷、重氮甲烷、對溴苄基溴、三氟化硼-甲醇等。
化學衍生化HPLC分析包括柱前和柱後衍生化兩種方法。柱前衍生化分析中，衍生化胺、胺基酸和氨基醇類化合物的試劑有：丹醯氯、螢光胺、9-芴甲氧羰醯氯、鄰苯二醛等；衍生化羰基化合物的試劑有：2，4-二硝基苯肼、丹醯肼等；衍生化羧酸常用的試劑為2，4'-二溴苯乙酮；衍生化醇類化合物常用的試劑為3，5-二硝基苯甲醯氯、五氟苯甲醯氯等。
由於柱前衍生化法是在分離前使藥物與衍生化試劑反應。故與藥物具有相同官能團的干擾物質也同樣會生成衍生物，並有可能妨礙藥物的檢測。如果幹擾物質含量高時，甚至會影響待測成分的衍生化效率。因此，應儘可能將樣品進行分離純化後再衍生化。
柱後衍生化是藥物經色譜分離後在流出液中進行衍生化，以形成對檢測器具有高靈敏度回響的衍生物，從而提高檢測靈敏度。如胺基酸分析儀中的柱後茚三酮衍生化。
具有光學異構體的藥物，由於R（-）與S（+）構型的不同，使之具有不同的藥效和藥動學特性。因此，異構體的分離檢測十分重要。光學異構體的分離可採用不對稱試劑衍生化，使其生成非對映異構體衍生物，再進行色譜分離測定。常用的不對稱衍生化試劑有：（-）-1-（9-芴基）乙基氧甲醯氯、（+）-樟腦磺醯氯、2，3，4，6-四-O-苯甲醯-β-D-葡萄吡喃糖基異硫氰酸酯、（R）-（+）-1-（1-萘基）乙胺等。
樣品測定
常用方法
體內樣品分析常用的方法有免疫分析法和色譜分析法。
免疫分析法是基於抗體與抗原或半抗原之間的高選擇性反應而建立起來的一種生物化學分析法。具有很高的選擇性和很低的檢出限，可以套用於測定各種抗原、半抗原或抗體。免疫分析法分為螢光免疫法、發光免疫法、酶免疫法及電化學免疫法等非放射免疫法和放射免疫法，測定的量可以達到μg甚至ng的水平。這些分析方法多配有專用設備和試劑，操作相對簡便，適合常規實驗室使用，多套用臨床治療藥物監測。
色譜分析包括：氣相色譜（GC）、高效液相色譜（HPLC）和色譜-質譜聯用（GC-MS、LC-MS）等，這些方法適用於複雜樣品中微量藥物的專屬準確定量，多用於藥代動力學研究。
定量分析
由於體內樣品取樣量少、藥物濃度低、內源性物質的干擾（如無機鹽、脂質、蛋白質、代謝物）及個體差異等多種因素影響體內樣品測定，為了保證方法的可靠性，必須在建立體內樣品分析方法的同時對方法進行驗證。
（一）特異性
必須證明所測定的物質是原形藥物或特定的活性代謝物，內源性物質和相應的代謝物及同時服用的其他藥物不得干擾樣品的測定。對於色譜法至少要提供6個不同來源的空白體內樣品色譜圖、空白體內樣品外加標準物質色譜圖（註明濃度）及用藥後的體內樣品色譜圖。
（二）標準曲線與線性範圍
根據所測定物質的濃度與回響的相關性，用回歸分析方法獲得標準曲線。標準曲線的高低濃度範圍為線性範圍，線上性範圍內濃度測定結果應達到試驗要求的精密度和準確度。
必須用至少6個濃度建立標準曲線，應使用與待測樣品相同的生物介質，線性範圍要能覆蓋全部待測濃度，不允許將線性範圍外推求算未知樣品的濃度。建立標準曲線時應隨行空白體內樣品，但標準曲線不包括零點。
標準曲線上各濃度點的實測值與標示值的偏差（bias）在可接受範圍內時，可判定標準曲線合格。偏差可按下式計算：
式中，回歸值系將各濃度點的回響值代人標準曲線計算所得的濃度值；標示值系指製備標準曲線時，各相應濃度點的配製濃度。
標準曲線上各濃度點偏差的可接受範圍一般規定為：最低濃度點的偏差在±20%以內，在其餘各濃度點的偏差在±15%以內。只有合格的標準曲線才能用於臨床待測樣品的濃度計算。當線性範圍較寬時，推薦採用加權最小二乘法（weighted least square method）進行同歸計算。
（三）定量下限
定量下限（LLOQ）是標準曲線上的最低濃度點，：要求至少能滿足測定3～5個半衰期時樣品中的藥物濃度，或Cmax的1/10～1/20時的藥物濃度，其準確度應在真實濃度的80%～120%範圍內。RSD應小於20%，S/N應大於5.應由至少5個標準樣品測試結果證明。
（四）精密度與準確度
要求選擇高、中、低3個濃度的質控（quality control，QC）樣品同時進行方法的精密度和準確度驗證。其中，低濃度接近定量下限（lower limit of quantitation，LLOQ），在LLOQ的3倍以內；高濃度接近標準曲線的上限（即定量上限，upper limit of quantitation，ULOQ），中間選一個濃度，每一濃度至少測定5個樣品。
精密度用QC樣品的批內（intra-batch）和批間（inter-batch）RSD表示，RSD一般應小於15%，在LLOQ附近應小於20%.
在測定批內RSD時，每一濃度至少製備並測定5個樣品。為獲得批間RSD應至少在不同天連續製備並測定3個分析批，至少45個樣品。
準確度是指用特定方法測得的體內樣品濃度與真實濃度的接近程度，一般應在85%～115%範圍內，在LLOQ附近應在80%～120%範圍內。
（五）樣品穩定性
根據具體情況，對含藥體內樣品在室溫、冰凍和凍融條件下以及不同存放時間進行穩定性考察，以確定體內樣品的存放條件和時間。還應注意考查儲備液的穩定性以及樣品處理後的溶液中分析物的穩定性，以保證測試結果的準確性和重現性。
（六）提取回收率
應考察高、中、低3個濃度的提取回收率。其結果應一致、精密和可重現。
（七）質控樣品
質控（QC）樣品系將已知量的待測藥物加入到生物介質中配製的樣品，用於質量控制。
（八）質量控制
應在體內樣品分析方法驗證完成之後開始測試未知體內樣品，每個樣品一般測定一次，必要時進行複測。每個分析批均應建立相應的標準曲線，並隨行測定高、中、低3個濃度的QC樣品，每個濃度至少雙樣本。並應均勻分布在未知樣品測試順序中。當一個分析批中未知樣品數目較多時，應增加各濃度QC樣品數，使QC樣品數大於未知樣品總數的5%，QC樣品數的增加以組（高、中、低3個濃度）為單位。QC樣品測定結果的可接受標準為：偏差應小於15%，低濃度點偏差應小於20%，最多允許1/3不在同一濃度的QC樣品結果超限。如QC樣品測定結果不符合上述要求，則該分析批未知樣品測試結果作廢。濃度高於ULOQ的未知體內樣品，應採用相應的空白介質稀釋後重新測定。
（九）測試結果
應詳細描述所用的分析方法，引用已有的參考文獻，提供每個分析批的標準曲線、質控樣品及未知樣品的測試結果及計算過程。還應提供全部未知樣品分析的色譜圖，包括全部相關的標準曲線、質控樣品的色譜圖，以供審查。
學科套用
（一）治療藥物監測的對象
對於治療安全濃度範圍窄、治療劑量與中毒劑量接近、毒副作用強、具有非線性藥代動力學特徵、長期使用藥效和毒性不明確、以及聯合用藥可能發生相互作用的藥物，通常都應當進行監測。應當進行治療藥物監測的藥物包括部分抗癲癇藥、抗心律失常藥、強心苷類藥、抗生素、抗精神病藥、抗哮喘藥、抗惡性腫瘤藥和一些解熱鎮痛藥，如表7-1所示。部分應當進行治療藥物監測的藥物的治療濃度範圍和中毒濃度，如表7-2所示。治療藥物監測示例見第十章第一節“苯巴比妥體內樣品的分析。
（二）在藥代動力學研究中的套用
地高辛在臨床上用於心衰治療，其有效濃度（0.8～2.0ng/ml）與中毒濃度（>2.4ng/ml）接近。消除半衰期長，成人的約為36小時、兒童的約為30小時，屬一級動力學。地高辛在腸部被吸收，60%～90%以原型經腎小球濾過或腎小管排泌，僅有約10%在體內通過氫化、水解、結合等反應代謝，另有約7%發生腸-肝循環。
以毛地黃毒苷為內標，對人血漿和尿液中地高辛濃度LC-MS測定如下。
（1）樣品處理方法精密吸取血漿1.0ml，置具塞離心管中，精密加入內標溶液（20ng/ml）50μl，加濃氨水100μl和甲基叔丁基醚5.0ml，振盪混勻30分鐘後，3000×g力離心10分鐘，分取有機層，置另一離心管中，在減壓離心條件下揮千，殘留物用100μl 含0.25mmol/L醋酸鈉的甲醇-水（40：60）流動相溶解，14000×g力離心2分鐘，取上清液15μl進行LC-MS分析。尿樣用空白血漿按1：10或1：50稀釋後照血漿方法處理和測定。
（2）色譜和質譜條件色譜柱C8（2.1mm×50mm，5μm）柱，流動相含0.25mmol/L醋酸鈉的甲醇（A）-水（B）梯度洗脫，流速0.25ml/min.電噴霧正離子化，噴霧電壓5000V，傳輸裂解電壓250V，乾燥氮氣溫度350℃，流速10.0L/min，噴霧口氣壓25psi.選擇性離子【M+Na】+監測（SIM），m/z分別為803.4（地高辛）和787.4（毛地黃毒苷）。
（3）測定結果血漿濃度線性範圍為0.05～1.5ng/ml，套用於人體藥代動力學研究，測得女性受試者口服0.25mg地高辛後的典型血漿濃度-時間曲線如圖7-2所示，其尿液48小時累積排泄量為30.2%。
