骨髓源性細胞在肝癌進展中的作用及相關機制研究

《骨髓源性細胞在肝癌進展中的作用及相關機制研究》是依託浙江大學，由林輝擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：骨髓源性細胞在肝癌進展中的作用及相關機制研究
• 依託單位：浙江大學
• 項目負責人：林輝
• 項目類別：青年科學基金項目

項目摘要

研究骨髓源性細胞在腫瘤形成、侵襲、轉移及靶向治療中的作用是近年來備受關注的重要課題。有關骨髓源性細胞對肝癌生物作用的研究目前報導尚少，且多局限於骨髓間充質幹細胞，其研究結果爭議較大。最近，課題組在骨髓源性細胞與肝癌細胞起源的研究中取得了階段性成果，我們的研究結果表明：肝癌並非起源於骨髓源性細胞，但骨髓源性細胞通過炎症浸潤和分化為腫瘤間質細胞參與肝癌的形成。本項目在現有研究工作基礎上，以HepG2、SMMC-772、MHCC97三株在致瘤性、侵襲性、轉移性方面互不相同的人肝癌細胞株為研究對象，首次系統研究骨髓間充質幹細胞和造血幹細胞在肝癌生長、侵襲及轉移中的生物作用；並利用全基因組表達譜晶片技術、Luminex液相晶片技術、sh-RNA基因沉默技術等分子生物學實驗技術，篩選、鑑定相關作用因子，探索相關作用機制，進一步揭示肝癌致病機制，為探索肝癌診療新方法、提高肝癌診治水平提供新思路。

結題摘要

研究骨髓源性細胞在腫瘤形成、侵襲、轉移及靶向治療中的作用是近年來備受關注的重要課題。有關骨髓源性細胞對肝癌生物作用的研究目前報導尚少，且其研究結果爭議較大。最近，課題組在骨髓源性細胞與肝癌細胞起源的研究中取得了階段性成果，我們的研究結果表明：肝癌並非起源於骨髓源性細胞，但骨髓源性細胞通過炎症浸潤和分化為腫瘤間質細胞參與肝癌的形成。本項目在現有研究工作基礎上，以“Bel7404、LM3、Huh7和Hep3B”四株在致瘤性、侵襲性、轉移性方面互不相同的人肝癌細胞株為研究對象，首先通過裸鼠移植瘤模型研究hMSC對不同肝癌細胞系相關生物學行為的影響。將人肝癌細胞系與hMSC相互作用後移植於裸鼠皮下，觀察hMSC對肝癌細胞系成瘤能力的影響，並使用免疫組化技術檢測人肝癌細胞在體內的增殖性、侵襲性及轉移性等生物學行為的改變情況，我們發現hMSC對不同肝癌細胞系的作用差異較大，其能夠明顯增強Bel7404和LM3細胞系在裸鼠皮下的成瘤能力，但對Huh7和Hep3B細胞系影響較小，進一步的免疫組織化學染色發現hMSC促進腫瘤細胞的增殖，並減少腫瘤組織中免疫細胞的招募(通過免疫細胞標記分子CD45和F4/80的染色證明)從而使腫瘤細胞產生免疫逃逸。為了進一步在體外試驗中證明這種作用，課題組將hMSC細胞分別與Bel7404、LM3細胞系共培養，通過直視下的細胞計數和CCK8實驗發現，在體外，hMSC細胞並不能增強Bel7404和LM3細胞的增殖能力，我們推測在hMSC細胞在裸鼠皮下對Bel7404、LM3細胞系的作用可能與動物體內的腫瘤微環境相關。通過Migration實驗、劃痕實驗和Invasion實驗我們發現，在體外，hMSC細胞能夠增強Bel7404和LM3細胞的遷移和侵襲能力。為了進一步研究產生這種作用的機制，我們對hMSC細胞+Bel7404混合成瘤的移植瘤與單獨Bel7404成瘤的移植瘤分別行了全基因組表達譜晶片技術，並從中篩選了部分表達改變明顯的基因。為了確保該轉錄組測序的可靠性，相關基因表達的改變在移植瘤和細胞系中做了進一步驗證。課題組對篩選得到的基因進行干擾後發現，hMSC細胞可能通過上調Bel7404、LM3細胞系中ITGA5水平發揮增強後者轉移和侵襲作用。該研究能夠為骨髓源性細胞對肝癌生物作用的研究提供較為有意義的借鑑。