《馬立克氏病病毒調控DNA損傷應答通路的分子機理》是錢鶯娟為項目負責人，南京農業大學為依託單位的面上項目。
基本介紹
- 中文名：馬立克氏病病毒調控DNA損傷應答通路的分子機理
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：錢鶯娟
- 依託單位：南京農業大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
馬立克氏病（MD）是由皰疹病毒引起的雞的一種傳染性腫瘤病，是養禽業重點控制的疫病之一。至今，馬立克氏病病毒（MDV）的致瘤分子機理尚不清楚。近年來，研究發現DNA損傷應答（DDR）信號通路幾乎是所有人類致瘤病毒的共同作用靶點。這一現象表明，DDR在病毒感染致瘤過程中起關鍵作用。因此，本項目擬深入研究MDV對DDR通路的調控機制，包括證實MDV感染對宿主細胞DDR通路的調節作用，套用全RNA測序（RNA-seq）的方法鑑定參與這一調節的病毒基因，闡明MDV病毒蛋白調節宿主細胞DDR的分子機理，並研究宿主細胞DDR對病毒感染效率的影響。該研究能夠為發現MD新的診斷標誌物和抗病毒靶點提供理論依據，並為研究病毒引起的人類腫瘤提供動物模型。
結題摘要
本研究目標是證實MDV感染對宿主細胞DDR通路的調節作用以及後者對病毒感染的影響，確定被MDV感染調節的具體DDR通路及調節機理，發現參與調節的病毒基因。在研究中，我們成功製備了DDR標誌物p53和p21的多抗，證明了MDV感染CEF細胞能夠引起DNA損傷以及p53和p21蛋白水平的上升；發現抑制ATR通路能促進，而激活ATR通路能抑制MDV感染；發現並證明了MDV感染能夠在早期升高Chk1磷酸化，但是在後期通過激活STAT3通路抑制Chk1的磷酸化，從而拮抗ATR通路對病毒感染的抑制作用。然後，我們初步探索了MDV感染對ROS的調節以及後者對DDR和MDV感染的影響：發現MDV感染引起CEF細胞內產生ROS；抑制ROS的產生能夠抑制STAT3的磷酸化而上調Chk1的磷酸化水平，從而抑制MDV感染。同時，我們總結分析了可能調節宿主DDR的多個病毒基因，包括核蛋白（UL3和UL4）、病毒複製相關基因（UL42、UL5和UL52）、立即早期基因ICP22、US3以及病毒主要致瘤基因Meq和pp38，進行克隆和表達，並積極探索了這些病毒蛋白對宿主細胞DDR的調節作用，但是僅初步證明了Meq對雞p21基因的表達的轉錄調節作用，Meq以及其它病毒基因對宿主DDR的調節作用有待進一步深入研究；在研究中，我們成功製備了首個能夠識別所有Meq亞型以及內源性Meq的多抗與單抗，為後期的研究奠定了重要基礎。此外，我們證明了DEC1通過轉錄調節其靶基因Clusterin從而調節DNA損傷引起的細胞死亡，為進一步研究MDV是否通過調節DEC1影響宿主細胞DDR或誘導細胞轉化致瘤提供了理論參考依據。最後，我們用RT-PCR和PCR方法首次分析鑑定了MDV感染丹頂鶴引起腫瘤的病例，該發現改變了我們對MDV感染譜的認識並對MDV在野外傳播的可能路徑提供了新思路。研究內容共發表了6篇中文核心期刊論文，1篇英文綜述， 2篇SCI論文，還有1篇論文投稿Journal of Virology（返修審稿中），培養了3名碩士研究生和 1名博士研究生畢業，項目參與人員參加國際會議2次，國內會議3次，達到了預定的技術指標和數量指標。
