《馬立克氏病毒感染調控TLR3的分子免疫機理研究》是依託揚州大學，由秦愛建擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：馬立克氏病毒感染調控TLR3的分子免疫機理研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：秦愛建
- 依託單位：揚州大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
馬立克氏病(MD)是世界上第一個能用疫苗進行免疫預防的腫瘤性疾病，同時也是第一個可以經胚胎接種進行預防的疾病。MD的免疫機理特別是天然免疫機理還不清楚。本項目在前期研究基礎上通過對MDV感染細胞的TLR檢測，明確參與MDV天然免疫的主要TLR信號通路；利用雜交瘤技術研製抗雞TLR3特異性單抗，進一步確定雞TLR3在MDV感染中的變化規律，並為家禽天然免疫提供工具；通過Real-time PCR、MicroRNA-靶基因螢光素酶報告系統等方法研究miR-155與雞TLR3基因表達的調控關係及其對RB1B感染的免疫識別，明確MDV逃避宿主監測和免疫的策略，了解MDV的致病機制，為更好地控制MD發生髮展提供理論依據，同時也為腫瘤預防提供新思考。本研究具有十分重要的理論意義和社會價值。
結題摘要
馬立克氏病毒（MDV）是一個高度致癌的α-皰疹病毒，導致機體免疫抑制和T淋巴細胞瘤。有資料表明，Toll樣受體3（TLR3）在抗病毒T細胞免疫以及腫瘤免疫中起主導作用，且TLR3激活的T細胞免疫應答對抵抗皰疹病毒感染是必須。本研究發現，在馬立克氏病病毒RB1B感染SPF雞後，胸腺組織中有28個與Toll樣受體介導的免疫以及MHC介導的免疫相關的基因呈現顯著變化；CD4和CD8分子表達與TLR3信號呈正相關，均顯著下調。體外研究發現，RB1B感染CEF後96小時，TLR3表達極顯著上調，高達40多倍，而其他TLR基因表達沒有出現顯著改變。以TLR3配體ploy (I:C)激活TLR3信號後，檢測病毒基因（gB和Meq）表達、病毒飾斑形成單位等，證實RB1B的感染和複製被顯著抑制；當RNA干擾抑制TLR3後也可以顯著促進RB1B的感染和複製，而其他TLR配體（LPS，Imiquimod 和 CpG）處理或TLR2/4抑制劑和MyD88抑制劑處理對RB1B感染和複製並無顯著影響。進一步研究發現mdv1-miR-M4-5p和gga-miR-155 mimic直接作用於TLR3編碼區抑制TLR3表達，這也是首次證實MDV編碼的microRNA可以直接作用於宿主基因編碼區發揮調控功能，這極大地豐富了microRNA調控理論。另外，本課題還利用poly(I:C)刺激MDV轉化的MSB1細胞，通過形態學、分子生物學、細胞生物學、免疫學等多種方法檢測細胞是否發生凋亡，結果顯示，poly(I:C)刺激能夠導致MSB1細胞的凋亡而不引起包括DF-1、CEF、CEK、HD11以及DT40等在內的其他禽源傳代細胞系或原代細胞調亡，同時MSB1細胞的凋亡數量與poly(I:C)終濃度和刺激時間呈顯著正相關，這種凋亡是由於TLR3配體poly(I:C)通過Caspase依賴性途徑特異性實現的，這一結果暗示poly(I:C)可用於MD的防治和淋巴瘤的治療。利用小分子抑制劑Pepinh-TRIF、BX795和Resveratrol對TLR3信號通路的不同接頭分子進行阻斷，結果發現這些分子可分別有效阻斷MSB1細胞中接頭分子TRIF、IRF3和NF-κB的活化，且對MSB1細胞活性沒有明顯影響，進一步明確了TLR3在抗MDV和抗腫瘤應答中的作用，為開發新型MDV疫苗以及抗腫瘤藥物提供了一定的理論參考。
