鞭毛的有無、多少和著生方式是細菌鑑定中的重要指標。在一般情況下，細菌的鞭毛因為太細(直徑為10～20nm)，故普通光學顯微鏡下無法觀察。但通過特殊染色方法使染料沉積在鞭毛上使其加粗，就可克服上述困難。鞭毛染色方法很多，現介紹常用的3種。
基本介紹
- 中文名：鞭毛染色法
- 外文名：flagella staining
- 細菌鑑定：鞭毛的有無、多少和著生方式
- 鞭毛：細菌的鞭毛因為太細
- 原理：特殊染色方法使染料沉積
- 方法：硝酸銀法等
簡介,硝酸銀法,Leifson氏法(1930年),Bailey氏鞭毛染色法(1929年),
簡介
鞭毛的有無、多少和著生方式是細菌鑑定中的重要指標。在一般情況下，細菌的鞭毛因為太細(直徑為10～20nm)，故普通光學顯微鏡下無法觀察。但通過特殊染色方法使染料沉積在鞭毛上使其加粗，就可克服上述困難。鞭毛染色方法很多，現介紹常用的3種。
硝酸銀法
染色操作：一、選用潔淨載玻片。二、配製染料，A液為丹寧酸5g，FeCI3 1.58，蒸餾水100ml，待溶解後，加1% NaOH 1ml和15%甲醛2ml。B液為AgNO32g，蒸餾水100ml。待AgNO3溶解後，取出10ml作回滴用，即向90ml B液中滴加濃氫氧化銨溶液，當出現大量沉澱時再繼續滴加，直至溶液中沉澱剛消失變澄清止。然後用保留的10ml B液小心地逐滴加入，至出現輕微和穩定的薄霧為止(此操作重要!)。在整個滴加過程中要邊滴邊充分搖盪。配好的染色液當日有效，4h內效果最好；三、菌液製備及塗片，取普通變形桿菌(Phote。oulgaris)等運動力強的菌種，在合適培養基上連續移種幾代，然後取用幼齡菌體製成懸液，在37℃溫箱放置10min，使鞭毛鬆開。挑取懸液於玻片一端，傾斜玻片，使菌液慢慢流向另一端，用吸水紙吸取多餘菌液後，氣乾；四、染色，先滴A液，染4～6min後用蒸餾水充分洗淨，再滴B液，在微火上加熱0.5～1 min(不使乾涸)，最後用蒸餾水洗後自然乾燥；五、用油鏡觀察。結果菌體與鞭毛均呈深褐至黑色。
Leifson氏法(1930年)
配製染料KAl(SO4)2飽和水溶液20ml，20%鞣酸10ml，蒸餾水10ml，95%乙醇15ml，鹼性復紅(95%乙醇飽和溶液)3ml。依次加人後充分混勻，放入試劑瓶中蓋緊(可保存1周)。染色操作：製備良好的塗片；滴加染液，30℃左右放置10Min；自來水洗；在室溫下用硼砂美藍(美藍0.18、硼砂1g加蒸餾水100ml配成)復染(也可省略此步)；自來水洗淨、氣乾和鏡檢。結果鞭毛紅色，細胞藍色。
Bailey氏鞭毛染色法(1929年)
本法適用於對土壤和水中無芽孢桿菌或植物病原細菌等易脫落鞭毛的染色(因它們長有的莢膜易使鞭毛脫落)。媒染劑配製：A液10%鞣酸18ml，6%FeCl3·6H2O 6ml；B液：A液3.5ml，0.5%鹼性復紅(乙醇溶液)0.5ml，濃HCl 0.5ml，福馬林2.0ml。染色操作：用幼齡菌液塗片；將過濾後的A液滴加在塗片上，放置3.5min(不加熱)；傾去A液(不必清洗)，加上過濾後的B液，放置7miri(不加熱)；用蒸餾水洗；滴加Zieht氏石炭酸復紅，微火上加熱1min；用自來水冼；氣乾後鏡檢。結果鞭毛紅色。
