雷公藤甲素體內外抗膠質瘤幹細胞效應的研究

中文摘要

膠質母細胞瘤是成人顱內最常見的惡性腫瘤，預後仍不理想。近來研究表明，信號轉導通路的異常活化以及腫瘤幹細胞的存在可能是膠質瘤發生、發展及治療抗拒的根源。我們的前期研究結果表明：（1）從膠質瘤患者腫瘤組織分離出膠質瘤幹細胞（GSCs），在體外具有多向分化的能力，在動物模型體內有較強的成瘤能力；（2）GSCs存在信號轉導通路的異常活化，對化療藥物更加耐藥；（3）中藥單體成分雷公藤甲素（TPL）在納摩爾濃度水平可對膠質瘤細胞株U87、SKMG-4、順鉑耐藥細胞株U251/CP2及膠質瘤原代培養細胞具有顯著的殺傷能力，並可抑制GSC形成腫瘤球的能力。本研究旨在探討：（1）TPL在體外單藥或聯合替莫唑胺(TMZ)對GSC的殺傷作用；（2）TPL抗膠質瘤幹細胞及逆轉化療抗拒的分子機制；（4）TPL在動物模型中單藥或聯合TMZ對膠質瘤的作用。

結題摘要

背景與目的：膠質母細胞瘤是成人顱內最常見的惡性腫瘤，預後仍不理想。我們的前期研究結果表明：（1）從膠質瘤患者腫瘤組織及膠質瘤細胞系分離出膠質瘤起始細胞（GICs），對化療藥物更加耐藥；（2）中藥單體成分雷公藤甲素（TPL）在納摩爾濃度水平可對膠質瘤細胞株具有顯著的殺傷能力。本研究旨在探討TPL在體內外單藥或聯合替莫唑胺(TMZ)對GIC的殺傷作用，闡明其相關分子機制。方法：（1）採用“懸浮克隆球形成法”誘導並鑑定GIC；（2）腫瘤球形成實驗檢測TPL單藥或聯合TMZ對GIC自我更新的影響；（3）MTS法檢測TPL單藥或聯合TMZ對GIC增殖的作用；（4）流式細胞法檢測TPL單藥或聯合TMZ對GIC細胞周期及凋亡的影響；（5）Western blot檢測TPL單藥或聯合TMZ處理後，細胞周期及凋亡相關蛋白的變化；（6）Western blot檢測TPL單藥或聯合TMZ處理後，NF-kB信號轉導通路相關蛋白及MGMT的變化；（7）螢光素酶報告基因檢測TPL單藥或聯合TMZ處理對NF-kB活化的影響；（8）小鼠顱內GIC原位模型檢測TPL單藥或聯合TMZ處理對生存期的影響。結果：（1）提取的GIC在體外能夠成球，表達神經幹細胞相關標誌物，分化誘導後，可表達膠質細胞標誌物。GIC在動物體內具有成瘤能力；（2）TPL單藥及與TMZ聯用後顯著抑制GIC自我更新的能力；（3）TPL單藥及與TMZ聯用後顯著抑制GIC的體外增殖能力；（4）TPL單藥及與TMZ聯用後顯著增加GIC細胞周期中Sub G1期的比例，明顯誘導GIC凋亡的產生；（5）TPL單藥及與TMZ聯用明顯下調細胞周期相關蛋白cyclin D1及凋亡相關蛋白Bcl-2與XIAP的表達；（6）TPL單藥及與TMZ聯用明顯下調GIC中NF-kB信號轉導通路相關蛋白的表達，但不改變MGMT的狀態；（7）TPL單藥及與TMZ聯用明顯下調NF-kB的轉錄活性；（8）TPL與TMZ聯用有延長實驗動物生存期的趨勢。完成情況及取得成果：項目依照計畫書進行，僅小部分內容進行調整。研究結果達到預期目標，表明TPL單藥對GIC具有殺傷作用，並與TMZ有協同作用，其機制主要是通過下調NF-kB信號轉導通路活性，誘導GIC產生凋亡。本項目培養研究生一名；發表中文綜述與論著各一篇；SCI雜誌（IF：2.2）一篇，已接收。英文書籍章節一章。

雷公藤甲素體內外抗膠質瘤幹細胞效應的研究

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