間接診斷

間接診斷是當致病基因已知而異常未知時，或致病基因本身尚屬未知時，可通過對受檢者及家系進行連鎖分析，以推斷前者是否獲得了帶有致病基因的染色體。在已經確定突變位點的情況下，PCR擴增含有這一突變位點在內的一段DNA片段，如果點突變正好涉及限制性內切酶酶切位點，用該限制酶切割PCR擴增產物，可以產生與正常不同長度的DNA片段，通過凝膠電泳就可能直接檢測到。在點突變沒

在點突變沒有涉及限制性內切酶酶切位點的情況下，可以套用等位基因寡核苷酸探針（allcle-specific oligonucleotide，ASO)通過斑點雜交進行檢測。針對每種突變合成一對寡核苷酸片段作為探針，其中一個具有正常序列，另一個則具有突變序列。突變的鹼基及正常的鹼基均位於寡核苷酸片段的中央，因為只有在此位置時，該鹼基與被探測的DNA上相應鹼基或匹配或錯配，對二者結合力影響最大。嚴格掌握雜交及洗脫條件，只有與探針序列完全相同的等位基因片段才顯示雜交信號，而與探針中央鹼基不相同的等位基因片段不顯示雜交信號。