《重型再生障礙性貧血中免疫激活抗原的研究》是依託天津醫科大學，由邵宗鴻擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：重型再生障礙性貧血中免疫激活抗原的研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：邵宗鴻
- 依託單位：天津醫科大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
自身抗原是誘發自身免疫應答、導致自身免疫性疾病的基礎。既往研究發現重型再生障礙性貧血（SAA）發病與未知抗原激活髓系樹突狀細胞（mDC）、進而引起一系列自身免疫反應導致骨髓造血功能衰竭有關。本課題擬採用雙向電泳及質譜技術篩選SAA患者與正常人骨髓mDC和造血乾祖細胞（HSC）內同源性(SAA患者mDC與HSC)差異（SAA與正常人）蛋白質成分，採用免疫印跡法驗證該蛋白質成分的表達，重組篩選出的蛋白質成分，利用活細胞共聚焦顯微鏡觀察mDC對該蛋白質的攝取，建立細胞模型分析該蛋白質對mDC的激活作用及激活後mDC對T淋巴細胞功能的影響，構建含該蛋白質成分相關基因的質粒轉染正常HSC，另將患者HSC內該蛋白質相應的基因序列敲除，分別與患者T淋巴細胞混合培養，檢測HSC凋亡狀況，完成對篩選出的蛋白質成分抗原性的驗證。通過上述研究闡明SAA的免疫發病機制，開闢基於該抗原物質靶向治療SAA的新策略。
結題摘要
重型再生障礙性貧血（SAA）是一組血液系統重症，特點為全血細胞重度減少和骨髓造血功能衰竭。目前認為自身免疫性T細胞功能亢進是SAA發病的主要免疫機制。近年來研究表明，髓樣樹突狀細胞數量(mDC)增多、功能亢進，引起Th1細胞比例升高，I型淋巴因子(IL-2、IFN-γ)分泌增多，引起細胞毒性T細胞（CTL）功能亢進，從而導致造血功能衰竭。而自身抗原是誘發自身免疫應答、導致自身免疫性疾病的基礎。本課題採用差異蛋白質組學技術與iTRAQ標記結合多維液相色譜分離和串聯質譜鑑定技術，篩選SAA患者與正常人骨髓mDC和造血乾祖細胞（HSC）內同源性(SAA患者mDC與HSC)差異（SAA與正常人）蛋白質成分，經BLAST序列比對及文獻結構分析顯示，LILRA3和PKM2在SAA 患者mDC 內水平升高，且SAA 患者mDC 內表達增高的LILRA3 與SAA 患者CD34+細胞內表達增高的LILRA5 胞外結構域的胺基酸序列高度同源，具有高結構同源性。進一步驗證顯示LILRA3 在SAA 患者mDC和CD34+細胞內基因水平或是蛋白水平均表達明顯增高。同時，SAA患者mDC內PKM2水平升高，並且與疾病進程呈現相關性。SAA患者mDC內升高的PKM2和LILRA3參與了mDC活化過程，刺激CTL功能分子表達水平升高，功能亢進；而骨髓靶細胞內表達升高的LILRA3 可使CTL增強對靶細胞的殺傷作用。成功建立SAA小鼠模型，在動物實驗中證實了PKM2對mDC細胞和T細胞的激活作用。SAA小鼠mDC細胞內的高PKM2表達促進了細胞的糖酵解代謝水平，為mDC細胞及下游T細胞增殖和活化創造了物質和能量條件。本項目還首次將SEREX方法套用於IRP靶抗原的尋找，並且證實該方法可行可靠；篩選出了7種可能的靶抗原蛋白，並將FTL以及EPOR包被ELISA板，並且用間接ELISA的方法進一步證實了它們的抗原性。另外，本次研究發現SAA患者的CTL存在乙醯化水平異常，且與患者免疫狀態及造血功能相關。總之，本研究結果為完善SAA免疫發病機制，研發新的靶向治療提供了依據。
