基本介紹
- 中文名：遞減聚合酶鏈式反應
- 外文名：touchdown PCR
簡介,聚合酶鏈式反應,簡併引物,
簡介
遞減PCR，亦稱降落PCR(touchdown PCR)是一種PCR（聚合酶鏈式反應）方法，用來避免非特異性序列的擴增。PCR中引物的黏合溫度(annealing temperature)決定了黏合的特異性，溫度越高特異性越強，但過高則不能實現引物和模板的結合，而過低會產生大量非特異性產物。因此進行PCR時需要尋找合適的黏合溫度。
遞減PCR開始先設定一個比較高的黏合溫度，每個循環黏合溫度下降1℃，到一個較低溫度以後每個循環的黏合溫度保持不變直到結束。在剛下降到特異性結合可以進行的最高溫度時，可以達到最高的特異性。這樣在起初的幾個循環中，特異性擴增序列可以相對非特異性序列多擴增若干倍，從而減輕非特異性擴增對結果的干擾。這種方法可用於省去多次試驗最佳黏合溫度的工作。
聚合酶鏈式反應
聚合酶鏈式反應（英文：Polymerase chain reaction，縮寫：PCR），是一種分子生物學技術，用於擴增特定的DNA片段，這種方法可在生物體外進行，不必依賴大腸桿菌或酵母菌等生物體。這種方法由凱利·穆利斯（Kary Mullis）於1983年開發，當時他是Cetus公司的雇員，也是1993年諾貝爾化學獎的獲得者，它是一種簡單，廉價和可靠的方法複製DNA片段，這個概念適用於現代生物學和相關科學的許多領域。 PCR可能是分子生物學中使用最廣泛的技術。這種技術被用於生物醫學研究，犯罪取證和分子考古學。
微生物複製是一個費時耗力的流程，首先要將DNA經限制酶剪裁，再利用連線酶（Ligase）加到載體（Vector）中，之後利用瞬間電擊（Electroporation）或是熱休克（Heat Shock）的方式，送到大腸桿菌感受態細胞（competent cell）中，將此菌於培養皿大量繁殖培養，再經過繁複的分離、純化過程，時間通常需要近一周，才能大量複製片段。所以僅需一小時的PCR能節省大量時間和繁複的操作，聚合酶鏈式反應技術被廣泛地運用在醫學和生物學的實驗室，例如用於判斷檢體中是否會表現某遺傳疾病的圖譜、傳染病的診斷、基因複製，以及親子鑑定。
簡併引物
用於聚合酶鏈式反應的特殊引子，含有化學合成的特殊鹼基，能和多種鹼基配對。用於讓引子順利配對到鹼基稍有不同的DNA。 例如ATCGC*CTGG引子*表示能與TC結合的特殊鹼基。能和TAGCGAGACC，TAGCGGGACC這兩種稍有不同的DNA完全配對。
