連線介導式聚合酶鏈反應

連線介導式聚合酶鏈反應是由於樣品中核酸含量低或序列不完全清楚，難以分析或使用，因而在樣品序列末端連線上已知序列，使用與此已知序列互補的引物專一性地擴增目的DNA片段的方法。引物設計的基本原則是最大限度地提高擴增效率和特異性，同時儘可能抑制非特異性擴增。

反應中的引物至少應含有18個與模板序列完全互補的核苷酸（常用軟體通常默認為20個），最大不能多於38個，否則最適延伸溫度會超過TaqDNA聚合酶的最適溫度（74℃），不能保證PCR擴增產物的特異性這樣才能保證擴增反應的特異性。引物擴增跨度以500核苷酸為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。