轉錄因子SRF調控胃癌轉移的作用及機制分析

《轉錄因子SRF調控胃癌轉移的作用及機制分析》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由謝華紅擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：轉錄因子SRF調控胃癌轉移的作用及機制分析
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：謝華紅
• 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學

中文摘要

轉移是胃癌患者死亡的主要原因，轉錄因子調控是其關鍵，轉錄因子活性檢測對研究胃癌轉移更有意義。本實驗室前期將人GC9811及其經裸鼠腹膜種植後獲得的高轉移潛能GC9811-P兩株胃癌細胞系用轉錄因子活性譜晶片進行兩次高通量篩選，得到17個活性差異的轉錄因子。經初篩選擇潛力較大的轉錄因子SRF多為研究對象，用免疫組化及實時定量PCR方法在臨床組織中驗證，結果顯示與無轉移的胃癌組織相比，有轉移的胃癌組織中SRF陽性率明顯增高,下調SRF表達後胃癌細胞轉移能力下降。本課題擬在前期研究基礎上，通過轉染、EMSA、實時定量PCR等方法，在體內、外及臨床標本水平多途徑驗證差異轉錄因子SRF在胃癌轉移中的作用；通過MicroRNA晶片、報告基因及CHIP等實驗，探討SRF通過哪些含SRF結合元件的分子（如已預測的43個MicroRNA分子）調控胃癌轉移的轉錄機制，為胃癌轉移研究提供新的預測指標和干預靶點。

結題摘要

我們按照研究計畫完成了本項目。採用高通量轉錄因子活性譜晶片，通過對低轉移胃癌細胞系GC9811和高轉移胃癌細胞系GC9811-P進行兩次差異篩選，選擇出SRF為研究對象進行進一步研究。採用免疫組化及Western Blot檢測SRF在胃癌原發灶、淋巴結轉移灶及遠端轉移組織中的表達，結果發現與原發灶等組織相比，活化的SRF（p-SRF）主要定位於胃癌轉移組織細胞的胞漿和胞核中，以胞核為主；SRF在低轉移胃癌組織及細胞中主要為胞漿表達。成功構建了SRF的siRNA載體，轉染胃癌高轉移細胞系GC9811-P細胞和胃癌SGC7901細胞。結果發現SRF siRNA轉染後，GC9811-P細胞和SGC7901對細胞外基質Matrigel的粘附能力下降，其運動、遷移及侵襲能力也顯著下降。體內轉移實驗表明，SRF siRNA能明顯抑制GC9811-P及SGC7901細胞的肝臟、肺臟及腹膜轉移能力。而採用SRF正義質粒上調胃癌低轉移細胞系GC9811及SGC7901細胞系後，兩細胞系的侵襲、遷移、粘附能力顯著增強。利用MicroRNA晶片，發現miR-199a及miR-7可能是SRF的下游調控分子。在SRF高表達的胃癌轉移組織及細胞中，miR-199a-3p和miR-199a-5p也為高表達。SRF siRNA抑制SRF的表達後，GC9811-P細胞中的miR-199a-3p和miR-199a-5p表達顯著下調。miR-199a-5p可以促進胃癌細胞的轉移，而miR-199a-3p沒有顯著作用。並且SRF在胃癌細胞細胞核內可以直接結合miR-199a-1和miR-199a-2的啟動子區域，進而正向啟動miR-199a-1和miR-199a-2的轉錄，調節miR-199a-3p和miR-199a-5p的表達。而miR-7高轉移性胃癌細胞株和腫瘤轉移組織中的表達都顯著下調。體內外實驗發現，miR-7表達升高后，胃癌細胞運動侵襲能力下降；miR-7表達降低後，胃癌細胞運動侵襲能力升高。並且胰島素樣生長因子-1受體（IGF1R）是miR-7的直接作用靶蛋白。使用siRNA沉默IGF1R的表達，miR-7具有抗腫瘤轉移潛能，而恢復IGF1R的表達會抑制胃癌細胞中miR-7的功能。miR-7通過靶向作用於IGF1R抑制Snail，進而增加E-鈣粘素的表達，部分逆轉上皮間質轉化（EMT）。