變性聚丙烯醯胺凝膠電泳

變性聚丙烯醯胺凝膠電泳（PAGE）是根據寡核苷酸的大小來分離，因此可將全長產物與不完整的短分子分開。原理：蛋白質或多肽與SDS結合，經熱變性和二硫鍵的還原，形成所帶負電荷相對一致的非摺疊衍生物，其泳動速度主要由分子量決定。

基本介紹

• 中文名：變性聚丙烯醯胺凝膠電泳
• 簡稱：PAGE
• 根據：寡核苷酸的大小來分離
• 結果：將全長產物與不完整的短分子分開
• 影響因素：泳動速度主要由分子量決定
• 目的：長度正確的寡核苷酸從凝膠上切下

簡介

變性聚丙烯醯胺凝膠電泳（PAGE）是根據寡核苷酸的大小來分離，因此可將全長產物與不完整的短分子分開。電泳時通常每一泳道至少加1mg合成的寡核苷酸，電泳後在紫外燈下定位寡核苷酸條帶，將長度正確的寡核苷酸從凝膠上切下。

技術流程

PAM沉澱的技術流程

沉澱是發生化學反應時生成了不溶於反應物所在溶液的物質。從字意上理解就是在重力作用下沉澱去除。污水中的懸浮物質，可以這是一種物理過程，簡便易行，效果良好，是污水處理的重要技術之一。

根據懸浮物質的性質、濃度及聚丙烯醯胺絮凝性能，沉澱可以分為：自然沉澱，絮凝沉澱，區域沉澱。域沉澱的懸浮顆泣濃度較高(5000mg/L以上)，顆粒的沉降受到周圍其它顆粒影響，顆粒間相對位置保持不變，形成一個整體共同下沉，與澄清水之間有清晰的泥水界面。二次沉澱池與污泥濃縮池中均有區域沉澱發生。

廢水中懸浮固體濃度不高，而且不具有凝聚的性能，在沉澱過程中，固體顆粒不改變形狀，也不互相粘合，各自獨立地完成沉澱過程，（沉砂池和初沉池的初期沉澱）壓縮沉澱發生在高濃度懸浮顆粒的沉降過程中，由於懸浮顆粒濃度很高，顆粒相互之間已擠集成團塊結構，互相接觸，互相支承，下層顆粒間的水在上層顆粒的重力作用下被擠出，使污泥得到濃縮。二沉池污泥斗中的聚丙烯醯胺濃縮過程以及在濃縮池中污泥的濃縮過程存在壓縮沉澱。自由沉澱發生在水中懸浮固體濃度不高，沉澱過程懸浮固體之間互不干擾，顆粒各自單獨進行沉澱，顆粒的沉澱軌跡呈直線。整個沉澱過程中，顆粒的物理性質，如形狀，大小及比重等不發生變化。這種顆粒在沉砂池中的沉澱是自由沉澱。

絮凝沉澱是顆粒物在水中作絮凝沉澱的過程。在水中投加混凝劑後，其中懸浮物的膠體及分散顆粒在分子力的相互作用下生成絮狀體且在沉降過程中它們互相碰撞凝聚，其尺寸和質量不斷變大，沉速不斷增加。懸浮物的去除率不但取決於沉澱速度，而且與沉澱深度有關。地面水中投加混凝劑後形成的礬花，生活污水中的有機懸浮物，活性污泥在沉澱過程中都會出現絮凝沉澱的現象。

用途　

1. 用於污泥脫水根據污泥性質可選用本產品的相應型號，可有效在污泥進入壓濾之前進行污泥脫水，脫水時，產生絮團大，不粘濾布，壓濾時不散，流泥餅較厚，脫水效率高，泥餅含水率在80%以下。

2. 用於生活污水和有機廢水的處理，本產品在配性或鹼性介質中均呈現陽電性，這樣對污水中懸浮顆粒帶陰電荷的污水進行絮凝沉澱，澄清很有效。如生產糧食酒精廢水，造紙廢水，城市污水處理廠的廢水，啤酒廢水，味素廠廢水，製糖廢水，有機含量高 廢水、飼料廢水，紡織印染廢水等，用陽離子聚丙烯醯胺要比用陰離子、非離子聚丙烯醯胺或無機鹽類效果要高數倍或數十倍，因為這類廢水普遍帶陰電荷。

3. 用於以江河水作水源的自來水的處理絮凝劑，用量少，效果好，成本低，特別是和無機絮凝劑複合使用效果更好，它將成為治長江、黃河及其它流域的自來水廠的高效絮凝劑。

4. 造紙用增強劑及其它助劑。提高填料、顏料等存留率、紙張的強度。

5. 用於油田經學助劑，如粘土防膨劑，油田酸化用稠化劑。

6. 用於紡織上漿劑、漿液性能穩定、落漿少、織物斷頭率低、布面光潔。

電泳實驗步驟

凝膠的製備：

凝膠由分離膠和濃縮膠組成：上層為濃縮膠，凝膠孔徑較大，沒有分子篩效應，其pH為6.8，由於快慢離子所形成的高電壓梯度，使得變性蛋白質分子在泳動中被壓縮為很薄的一層，大大提高了解析度。下層為分離膠，凝膠孔徑較小，有分子篩效應，pH為8.8，變性蛋白質分子所帶負電荷基本一致，泳動速度主要決定於分子量。

製備順序為先灌制分離膠，然後在分離膠上灌制濃縮膠： （四人一組）

1. 在兩塊玻璃板間夾以墊條，用手夾住玻璃板放入電泳槽主體內，缺口朝外，再插入斜楔板。

2. 拿一小燒杯，按下表加入各試劑： （12%分離膠）

單體溶液	4ml
分離膠緩衝液（pH8.8）	2.5ml
分離膠緩衝液（pH8.8）	3.3ml
10%SDS	100ul
10%TEMED	30ul
10%過硫酸銨	70ul

3. 上述溶液混勻後，用滴管迅速加入兩玻璃板間，灌注高度為紅色背景下沿線。然後滴上少量水飽和異丁醇，靜置約15分鐘。

4. 待凝膠與異丁醇出現分層時，倒去異丁醇，用洗瓶沖洗凝膠頂部，然後拿一燒杯，按下表加入各試劑： （4%濃縮膠）

單體溶液	0.4ml
濃縮膠緩衝液（pH6.8）	0.38ml
超純水	2.15ml
10%SDS	30ul
10%TEMED	15ul
10%過硫酸銨	30ul

5. 上述溶液混勻後，用滴管迅速加入已制好分離膠的玻璃板間，灌滿後，小心插入梳子，靜置30分鐘。

6. 待濃縮膠凝固後，小心拔出梳子。小心取出玻璃板，取掉墊條後，缺口朝內放入電泳槽主體，插入斜楔板。 兩組用一個電泳槽主體，兩組玻璃板間即為上槽。

7. 裝好的電泳槽主體放入下槽，往上下槽加入 Tris－甘氨酸電極緩衝液。用滴管沖洗凝膠頂部，並趕走底層的氣泡。

樣品製備：

蛋白質樣品需變性並結合SDS，形成所帶負電荷相對一致的非摺疊衍生物。四人一組，取一1.5離心管，加入30ul鼠IgG樣品和30ul樣品緩衝液，混勻後沸水浴5分鐘，3000rpm離心數秒，每人取10ul加樣。

電泳：

連線電泳儀，選擇電壓為40伏，藍色指示劑移動至凝膠底部即停止電泳。取出玻璃板，用保鮮膜包好，置冰櫃待明日做蛋白印漬（Western－Blotting）。

區別

非變性凝膠裡面沒加變性劑，一般是SDS。非變性膠跑出來的蛋白能保持其活性一般用做功能試驗，如EMSA。由於沒有變性劑的原因非變性膠電泳時除了與蛋白分子量有關也會受都電荷的影響，因此對蛋白等電點的確定和緩衝液的酸鹼性有注意，有時需要倒轉電泳時的正負極。從跑的膠來看，變性膠會比較好看，帶比較窄，非變性膠跑出來則比較粗糙。