調節骨肉瘤轉移的相關miRNA研究

《調節骨肉瘤轉移的相關miRNA研究》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由單樂群擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：調節骨肉瘤轉移的相關miRNA研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：單樂群
• 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學

中文摘要

腫瘤轉移是造成骨肉瘤患者死亡的主要原因。研究表明，miRNA是一種廣泛參與細胞生理及病理活動的非編碼小RNA分子，其在多種腫瘤的生長、侵襲及轉移中發揮重要的節點調節作用。然而，與骨肉瘤轉移相關的miRNA及其調節轉移的分子機制目前仍不明確，鮮有文獻報導。本課題利用已經建立的、具有不同轉移潛能的骨肉瘤細胞亞系，通過miRNA晶片技術比較了兩個亞系miRNA表達譜的改變，初步分析了可能參與骨肉瘤轉移的四種miRNA分子。本課題擬在已有的研究基礎上，首先對上述差異miRNA調節骨肉瘤轉移的作用進行功能驗證；進而尋找這幾種差異miRNA分子的可能靶基因；最終明確miRNA調節骨肉瘤轉移可能的分子通路及相關機制。本課題的研究將不僅為進一步闡明骨肉瘤轉移的分子機制奠定一定的理論基礎，更為尋找新的候選靶向分子及研發腫瘤轉移預防治療藥物提供依據。

結題摘要

本項目整體進展順利，基本按期完成了任務書規定的各項研究內容和研究指標，除計畫中規定的研究內容外，本項目還對目標miRNA的自身調控機制進行了更深入的研究。本課題在前期工作中建立不同轉移潛能的骨肉瘤細胞亞系F4（低轉移性）、F5M2（高轉移性），在此基礎之上，我們進行體內腫瘤轉移試驗，研究結果顯示F4與F5M2細胞亞系的骨肉瘤細胞在體內轉移潛能有著明顯的差異。我們通過miRNA晶片分析篩選得到一組可能與骨肉瘤細胞轉移相關差異表達miRNA分子並套用real time PCR驗證，證實了在高轉移的F5中miR-886-3p、miR-936等miRNA分子表達上調，而miR-193b和miR-let-7d*等miRNA分子表達下調。我們以在高轉移潛能F5M2細胞中表達水平顯著下降的miR-193b為研究對象。進一步的研究結果顯示miR-193b的模擬物能夠抑制高轉移F5細胞的侵襲和轉移能力，而miR-193b的抑制劑則能夠提高低轉移F4細胞的侵襲和轉移能力，提示miR-193b參與了對骨肉瘤細胞轉移的調控。經線上軟體預測、螢光素報告系統驗證及RT-PCR和WB檢測，我們證實了Stathmin1的表達水平與腫瘤細胞的轉移能力正相關，而Stathmin1是miR-193b的直接把基因。miR-193b通過下調Stathmin1來抑制骨肉瘤細胞的侵襲和轉移能力。通過生物信息學分析我們還發現miR-193b上游啟動子區有典型的CpG島存在，基因組DNA甲基化實驗證實在具有高轉移特性的F5細胞中，miR-193b上游啟動子調控區被高度甲基化，而沒有高轉移特性的F4細胞miR-193b啟動子區則很少發生甲基化，提示在F5M2細胞中， miR-193b的表達受到DNA甲基化的表觀調控，高甲基化抑制了miR-193b的表達，並相應增強了Stathmin1表達，從而促進了腫瘤細胞發生侵襲和轉移。我們的研究展現了一條完整的轉移相關miRNA的作用通路，為骨肉瘤轉移的治療提供了新的治療靶點。在本課題執行期間，課題組在國際期刊上發表了兩篇帶有課題編號的論文，其中一篇為SCI論文。此外，另有一篇論文正在整理過程中。