基本介紹
- 中文名：調控YAP基因對銀屑病角質形成細胞增殖的影響
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：劉瑛
- 依託單位：山東大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
銀屑病的發病機制尚未完全闡明，信號轉導通路異常在銀屑病的皮損形成中發揮關鍵作用並與銀屑病的免疫機制息息相關，Hippo-YAP信號通路是近年來倍受關注的一個調控細胞增殖凋亡和組織器官大小的關鍵信號途徑，我們前期研究也證實YAP蛋白在銀屑病皮損中處於高表達狀態，由此提出Hippo-YAP信號通路可能在銀屑病發病機制中起重要作用。本項目擬運用RNA干擾、real-time RT-PCR、western blot等技術手段，從組織標本原位分析、細胞培養到動物模型實驗，探討YAP在銀屑病皮損中的激活狀態及調控YAP對IL-22誘導的原代角質形成細胞生長、增殖、凋亡及分泌炎症因子的影響，並初步了解YAP與銀屑病相關信號通路Wnt互動作用。本研究將為系統闡明Hippo-YAP信號通路在銀屑病發病、治療中的作用提供研究基礎，也有助於進一步加深對Hippo-YAP信號的認識。
結題摘要
銀屑病的發病機制目前尚未完全闡明，信號轉導通路異常在銀屑病的皮損形成中發揮關鍵作用並與銀屑病的免疫機制息息相關，Hippo-YAP信號通路是近年來倍受關注的一個調控細胞增殖凋亡和組織器官大小的關鍵信號途徑，我們前期研究也證實YAP蛋白在銀屑病皮損中處於高表達狀態，由此提出Hippo-YAP信號通路可能在銀屑病發病和治療中起重要作用。本項目擬運用RNA干擾、ELISA、western blot等技術手段，從組織標本原位分析、細胞培養到後期動物模型，探討YAP在銀屑病皮損中的激活狀態及調控YAP對角質形成細胞生長、增殖、凋亡及分泌炎症因子的影響，並初步了解YAP與銀屑病相關信號通路Wnt互動作用。 主要結果和關鍵數據：（1）免疫組化結果顯示YAP、磷酸化YAP（P-YAP）在銀屑病皮損中表達水平增高（2）Hacat細胞培養，構建慢病毒，干擾細胞中YAP1基因表達，western blot實驗確認干擾效果。（3）基因晶片檢測慢病毒轉染前後對細胞分泌細胞因子的影響及各個信號通路的影響，從基因水平篩選數據。（4）慢病毒感染前後對細胞周期和細胞凋亡的影響，實驗結果：相比對照組shYAP1組處於S期的細胞經T-Test分析P>0.05，處於G1期的細胞經T-Test分析P<0.05，處於G2/M期的細胞經T-Test分析P<0.05。相比對照組，shYAP1組凋亡數經T-Test分析P<0.05。（5）用Western blot檢測調控前後細胞中FAS、caspase3及caspase8表達水平的變化和細胞周期蛋白CyclinD1、CyclinA及CyclinE的變化。（6）ELISA方法檢測YAP基因不同激活狀態下，角質形成細胞分泌相關細胞炎症因子IL-17、IL-6、TNF-a及VEGF蛋白的表達。（7）構建咪喹莫特小鼠模型成功，觀察到YAP siRNA 體內注射對咪喹莫特誘導銀屑病樣皮損有抑制效應。 本研究將為系統闡明Hippo-YAP信號通路在銀屑病發病、治療中的作用提供研究基礎，也有助於進一步加深對Hippo-YAP信號的認識。
