親和分配

親和分配,根據各組分的親和能力不同而分離,常用在生物方面,如分離蛋白質,多肽等.通過在反應體系中引入三乙胺,使反應成為熱力學上有利而大大提高了反應效率,減少了二氯亞碸的用量,並簡化了工藝操作.考察了反應溫度、反應時間、二氯亞碸和三乙胺加入量等因素對活化效果的影響,得到了活化程度較高的介質.

原理

根據各組分的親和能力不同而分離,常用在生物方面,如分離蛋白質,多肽等

優勢

以二氯亞碸(SOCl2)為羥基氯化試劑,聚乙二醇(PEG)為對象,對親和配基合成中基質上羥基活化的常規方法進行了改進:通過在反應體系中引入三乙胺,使反應成為熱力學上有利而大大提高了反應效率,減少了二氯亞碸的用量,並簡化了工藝操作.考察了反應溫度、反應時間、二氯亞碸和三乙胺加入量等因素對活化效果的影響,得到了活化程度較高的介質[1.54 mol Cl·(mol PEG)-1],並與常規二氯亞碸法和環氧氯丙烷法進行了比較.

親和分配

親和分配

 

實驗結論

 利用金屬螯合親和雙水相分配技術對納豆激酶的分離純化進行了研究。考察了雙水相系統、聚合物的分子量和濃度、親和配基加入量、pH值、相比以及生物質加入量等因素對親和分配的影響。結果表明,雙聚合物系統比聚合物/無機鹽系統更有利於納豆激酶親和分配;pH值和親和配基加入量是影響分配的關鍵因素。最佳化的分配條件為:2.6%聚乙二醇,20.2%羥丙基澱粉,5% 親和配基PEG-IDA-Cu(II),相比1.2,pH 8.2,發酵液加入量15%。分配系統放大到100g,仍保持一致的酶活收率(90%)和純化因子(2.0)。設計了兩次分配分離流程,純化因子達到3.52,總收率為81%。