操作步驟
(1)抗原片製備:Nichols株梅毒螺旋體(每高倍視野20條)抗原懸液,在玻片上塗數個直徑為5mm的菌膜,乾後以甲醇固定。
(2)待檢血清預處理:待檢血清先經56%30分鐘滅活,取50ul血清與200ul吸附劑(Reiter株非致病密螺旋體)混勻,37℃作用30分鐘,以充分吸除非特異性抗體。
(2)夾心法螢光顯色:吸附後的待檢血清用磷酸鹽緩衝液(PBS)作1;20—1:320的倍比稀釋,將稀釋後的血清分別滴加於抗原菌膜上,置濕盒內37℃孵育30分鐘,然後用PBS洗片,並將玻片在PBS中浸洗,換液3次,每次5分鐘,吹乾。各抗原反應片上滴加工作濃度螢光素標記的羊抗人lgG抗體,置濕盒37℃孵育30分鐘,再用PBS按前法洗片,乾後用甘油緩衝液封片。
(3)螢光顯微鏡觀察:每次實驗設陽性、陰性、非特異性血清對照。陰性標準血清無螢光菌體或偶爾見螢光菌體出現:陽性對照可見多數(高倍視野15條)螢光菌體出現。並以此為參照作出待檢標本的判定。