《膜型乳鐵蛋白在B細胞免疫功能中的作用及其機制研究》是依託蘇州大學，由王俊擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：膜型乳鐵蛋白在B細胞免疫功能中的作用及其機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：王俊
- 依託單位：蘇州大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
乳鐵蛋白（LTF）是一個具有抗菌和免疫調節能力的多功能分子，在感染性疾病和腫瘤的預防、診斷和治療方面有一定的套用前景。LTF既能以分泌蛋白（sLTF）的形式廣泛存在於體液內，也能以膜蛋白（mb-LTF）的形式表達在細胞表面，但至今對mb-LTF功能的研究尚未見報導。我們近期的研究發現，人和小鼠的B細胞高表達mb-LTF, mb-LTF能夠識別並結合LPS和ZPS（一種beta-葡聚糖）等病原體相關的分子模式（PAMPs），且其交聯可有效的活化小鼠B細胞。因此，我們推測mb-LTF可作為細胞表面的一個參與信號通路轉導的膜受體而發揮免疫功能。本課題擬系統性的研究mb-LTF在人和小鼠B細胞對T細胞依賴和非依賴性抗原免疫應答中的作用及分子機制，包括其在膜上的接頭蛋白及所介導的分子信號轉導通路等。本研究將闡明LTF免疫調節功能的全新機制，並為其在預防和治療疾病上的套用開闢新的思路。
結題摘要
我們前期利用商品化LTF多克隆抗體的研究顯示B細胞高表達膜型乳鐵蛋白(mb-LTF)，且用該多抗將其交聯可有效的活化小鼠B細胞，提示mb-LTF可作為膜受體而發揮免疫調節功能。在國家自然科學基金委的支持下，課題組對 mb-LTF/LTF的免疫學功能和機制以及B 細胞的功能調控這兩方面進行了深入細緻的研究。作為本課題的基礎性工作，我們首先就B細胞增殖和分化的分子機制進行了探討，發現下調ZBTB24可通過上調IRF-4和Blimp-1而抑制了人B淋巴細胞株Raji的細胞周期，提示其可作為B細胞功能調控中的一個全新轉錄因子而在體內的抗體免疫反應中發揮重要作用。隨後我們成功製備了一株人LTF (huLTF)特異性的單克隆抗體 (M-860)。該抗體為小鼠IgG1(kappa)型，可用於FACS檢測細胞表面mb-LTF的表達及功能研究。我們發現可溶性M-860可通過細胞表面的mb-LTF而活化人的中性粒細胞 (huPMNs)，且這一作用是部分依賴於細胞表面的TLR-4和CD14的表達，表明mb-LTF確實可作為細胞膜受體並藉助於TLR-4/CD14等跨膜分子而調控免疫細胞的功能。後續實驗發現分離純化的小鼠B細胞似乎並不表達LTF的 mRNA和蛋白，而且LTF抗體對小鼠B細胞的刺激作用可能是由抗體蛋白變性後所形成的聚集物所導致的，這一結果與利用商品化LTF的多克隆抗體所得到的結果相左。為了進一步豐富課題的研究內容，我們還探討了LTF免疫複合物的免疫調節功能和重組表達huLTF c-lobe的直接殺傷腫瘤細胞的作用，在今後的工作中將對這兩方面的分子機製作進一步的研究。總之，本研究不僅闡述了LTF免疫調節功能的全新機制，拓展了我們對B細胞的生物學功能的認識，還為感染和自身免疫性疾病的預防及治療方面開闢了新的思路。本課題執行期間發表SCI論文5篇，均標註本項自然科學基金的資助。
